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研究目的: 肺癌是世界上恶性肿瘤死亡率最高的疾病,分子靶向治疗是近年来肺癌治疗的新突破。转录因子 FOXM1与肿瘤的发生发展过程密切相关,并作为抑癌性分子FOXO3a及多种抗肿瘤药物的靶点。但目前关于FOXM1对表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂在肺癌靶向治疗中的影响及分子机制尚不清楚。 研究方法: 1. AG1478处理人肺癌细胞,CCK-8法检测细胞增殖状态;RT-PCR、Western blot及荧光素酶报告系统法分别检测FOXM1 mRNA、蛋白表达及其启动子活性的改变。 2. FOXM1 siRNA转染人肺癌细胞,Western blot法检测FOXM1蛋白表达变化;流式细胞计数、克隆形成试验及CCK-8法分别检测细胞周期分布、克隆形成能力及AG1478药物敏感性的改变。 3. AG1478处理人肺癌细胞,Western blot及细胞免疫荧光法检测FOXO3a分子的亚细胞分布。FOXO3a siRNA及pEGFP-N1-FOXO3a重组质粒转染细胞,Western blot法检测FOXM1表达的改变;ChIP法分析FOXO3a与FOXM1基因启动子的结合。 研究结果: 1. AG1478抑制肺癌细胞的增殖,下调FOXM1表达及其启动子活性,并促进活化FOXO3a的表达。 2.沉默FOXM1后,FOXM1 mRNA及蛋白表达明显下降,其下游CyclinB1、c-Myc、Bcl-2随之下降,而p21、Cleaved-PARP则被上调;细胞克隆形成能力明显降低,细胞周期阻滞在G2/M期;并明显增加细胞对AG1478的药物敏感性。 3. AG1478诱导FOXO3a的胞核重定位。沉默FOXO3a后,FOXM1 mRNA的表达明显增加,且AG1478介导的FOXM1表达抑制被部分削弱;过表达FOXO3a后,FOXM1的蛋白水平明显下降。FOXO3a与FOXM1基因启动子-1561~-1553序列结合。 研究结论: 在人肺癌细胞中,AG1478通过FOXO3a下调FOXM1分子表达,进而抑制细胞的增殖活性。