【摘 要】
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第一部分自体生物管道的形成机制目的:探讨自体生物管道的形成机制。方法:1、将Teflon管植入雄性SD大鼠腹壁皮下组织,术后第3、7、28天取出,利用显微外科技术将Teflon管道外壁组织剥离并包埋、冰冻切片,行免疫荧光染色和荧光显微镜观察。每个时间点6只大鼠。2、将Teflon管植入Vav1-cre/R26R-EYFP小鼠腹部皮下,术后7天取出,利用显微外科技术将Teflon管道外壁组织剥离并包
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第一部分自体生物管道的形成机制目的:探讨自体生物管道的形成机制。方法:1、将Teflon管植入雄性SD大鼠腹壁皮下组织,术后第3、7、28天取出,利用显微外科技术将Teflon管道外壁组织剥离并包埋、冰冻切片,行免疫荧光染色和荧光显微镜观察。每个时间点6只大鼠。2、将Teflon管植入Vav1-cre/R26R-EYFP小鼠腹部皮下,术后7天取出,利用显微外科技术将Teflon管道外壁组织剥离并包埋、冰冻切片,以CD45、CD68、CCR7、CD206、CD31、FSP1和α-SMA抗体染色后进行组织学分析,并进行炎症细胞的谱系追踪。结果:1、本研究发现多种细胞参与自体生物管道在体内的形成。术后4周可见成纤维细胞（FSP1+）和血管平滑肌细胞（α-SMA+）参与自体生物管道管壁形成。免疫反应在自体生物管道形成中起重要作用:巨噬细胞、T细胞和B细胞在第3天被招募。通过对样本组织进行CD68（巨噬细胞表面标记物）、CCR7（M1巨噬细胞标记物）和CD163（M2巨噬细胞标记物）免疫染色,CCR7+促炎巨噬细胞多见于自体生物管道与Teflon管交界面,且在第3天达到最高水平,7天后逐渐减少。CD163+抗炎巨噬细胞数量在第7天达到峰值,表明巨噬细胞由M1向M2转化。CD3+T淋巴细胞、CD4+辅助性T淋巴细胞和Fox P3+调节性T淋巴细胞也在第7天达到峰值,而B淋巴细胞数量较少。2、炎性细胞可转分化为成纤维细胞样细胞:大多数EYFP+细胞表达CD45和CD68,而不表达CD31,这表明巨噬细胞构成EYFP+细胞主要种类。并且发现了CCR7+（促炎）和CD206+（抗炎）巨噬细胞,大多数EYFP+细胞为CD206+,CCR7呈弱阳性,表明巨噬细胞表型可能发生转化。术后7天,EYFP+细胞表达FSP1,靠近Teflon管表面的一部分细胞表达α-SMA,提示炎性细胞可转分化为成纤维细胞样细胞,参与自体生物管道管壁形成。结论:1、成纤维细胞和巨噬细胞及T细胞参与自体生物管道管壁形成并在此过程中发挥重要作用。2、通过对炎性细胞谱系追踪,巨噬细胞表型转化及炎症细胞向成纤维细胞样细胞转分化参与自体生物管道管壁形成。第二部分自体生物管道大鼠颈动脉移植模型狭窄机制目的:探讨大鼠颈动脉移植模型自体生物管道血管移植物狭窄的主要细胞来源。方法:将Teflon管植入GFP+SD大鼠腹部皮下,术后4周,利用显微外科技术将Teflon管道外壁组织剥离,制成自体生物管道作为血管移植物,植入SD大鼠左颈总动脉。移植后4周取出血管移植物（n=7）,对组织分别进行HE染色、DAPI染色并观察染色结果,计算新生内膜GFP+细胞数。结果:所有自体生物管道血管移植物出现严重狭窄,HE染色结果显示血管移植物新生内膜形成,荧光显微镜观察可见约85.9±6.6%新生内膜细胞为GFP+细胞。结论:自体生物管道管壁细胞管腔迁移是其狭窄的主要细胞来源。第三部分自体脱细胞基质血管移植物的制备及其特征目的:探讨自体脱细胞基质血管移植物的制备方法并研究其特征。方法:将Teflon管植入雄性SD大鼠腹部皮下,术后2、3、4、5周取出,制成自体生物管道,以1M Na Cl彻底洗净,然后在37℃搅拌器上,用两性离子洗涤剂溶液（8m M CHAPS,1M Na Cl,25m M EDTA）进行脱细胞处理6-8小时。取脱细胞标本包埋、切片,应用Masson三色染色、Verhoeff染色、Western blotting进行组织学分析。另取标本电镜观察管腔内外表面,同时测定不同时间点脱细胞前后标本的力学性能。结果:1、组织学分析表明,自体生物管道血管移植物管壁脱细胞后保存了管壁主要胶原纤维,且内外表面高空隙率。同时发现自体生物管道血管移植物脱细胞管壁没有观察到弹力纤维,且脱细胞过程完全去除管壁组织细胞。2、通过比较不同时间点自体生物管道血管移植物力学性能,术后2、3、4周杨氏模量和极限抗拉强度（UTS）随时间增加而显著增加,术后4、5周无显著差异。同时脱细胞前后杨氏模量、UTS无显著性差异。结论:两性离子洗涤剂溶液可有效脱除自体生物管道管壁细胞且不影响其力学性能。
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