目的：观察体外无血清培养基条件下维甲酸（RA）能否诱导内耳祖代细胞分化为毛细胞。方法：取冻存内耳祖代细胞（CNPs）解冻后在25cm2的培养板中用DMEM/F12+N2+EGF+bFGF无血清培养基条件下培养3天，取生长状态良好的细胞在倒置显微镜下观察细胞形态特点。选择生长状态良好的细胞，用细胞免疫化学方法检测神经干细胞标志蛋白（Nestin）的表达，进一步鉴定细胞的分化情况。实验分为实验组和对照组。内耳祖代细胞爬片后用培养液诱导分化，培养液每天更换。诱导培养3天后收集细胞进一步检测。实验组分别进行如下实验：①用DMEM/F12+RA（10-6M）培养液进行诱导。②用细胞免疫荧光方法检测毛细胞标志物Math1、MyosinⅦa蛋白的表达；③提取诱导后的内耳祖代细胞的RNA，琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性；RT-PCR进行基因扩增，然后进一步用琼脂糖凝胶电泳检测毛细胞标志物基因的表达情况；④用Brdu荧光染色法检测细胞增殖，并用鬼笔环肽检测细胞骨架F-actin的表达情况。对照组细胞用DMEM/F12+DMSO(0.11mg/ml）培养液诱导。结果：1.内耳祖代细胞（CNPs）均可见到Nestin的表达。2.细胞免疫荧光法显示实验组和对照组均可见荧光，实验组和对照组Math1+、MyosinⅦa+细胞率分别是63%,1.5%;56%,0.96%。3.RT-PCR电泳结果显示实验组和对照组毛细胞标志物基因均有表达，但实验组的电泳条带较对照组明显。4.细胞增殖实验检测显示Brdu+细胞率RA组(20.6%)小于阴性对照(29.9%)组和阳性对照组(54.3%)，阴性对照组和阳性对照组之间有差异。5.F-actin细胞免疫荧光法对照组的细胞纤维方向相对一致，对照组纤维方向较乱，但荧光强度显示ctrl组，处理3天的对照组与实验组的差别没有统计学意义，分别为21.60,22.60,24.50。结论：1.内耳祖代细胞（CNPs）在无血清条件下生长良好，但未观察到明显分化现象，保持了神经干细胞的特性。2.经RA诱导培养的内耳祖代细胞毛细胞标志物Math1、MyosinⅦa明显增高，推测RA可能促使内耳祖代细胞分化为毛细胞。3.RA体外抑制了内耳祖代细胞增殖；RA促进内耳祖代细胞细胞骨架F-actin重新分布，但并未促进细胞骨架F-actin的形成。