论文部分内容阅读
本课题采用半定量RT-PCR法,检测了不同生长阶段金华猪和长白猪（35d、80d、125d）背最长肌中肌肉生长抑制素（Myostatin、MSTN）、生肌调节因子（MyoD）和肌肉成肌素（Myogenin、MyoG）的mRNA水平,探讨了他们的基因表达随动物体重增加的变化规律,以及在肌肉沉积过程中的调控作用。根据Genebank登陆的MSTN、MyoD、MyoG和内标β-actin基因序列设计引物,分别以背最长肌组织RNA为模板,经反转录和PCR,克隆得到的相应基因片段（登录号分别为NM 214435、SSU12574和NM001012406）同源性分别为97.0%、97.8%和93.6%。在此基础上,进一步探讨了PCR体系中适宜的退火温度、MgCl2浓度和循环次数,构建了适合于相应基因序列的优化半定量RT-PCR法,用于不同生长阶段金华猪和长白猪背最长肌组织MSTN、MyoD和MyoG基因mRNA水平的测定。试验所用的金华猪和长白猪由浙江省东阳市金华猪保种场提供,按照品种分两个组,每组18头（28日龄断奶）预试期7天;正试期90天,金华与长白猪在相同的条件下饲养。分别于35,80和125日龄时采集背最长肌样品,测定瘦肉率,探讨MSTN、MyoD和MyoG基因表达与肌肉沉积的关系。试验结果表明,猪背最长肌组织中MSTN、MyoD和MyoG基因表达均呈现一定的生物学发育规律:（1）在两种猪的不同生长阶段（35日龄,80日龄,125日龄）MSTN mRNA都被检测到,其表达量在出生后35日龄时水平较高,而后,随着年龄体重的增加而显著减少（P＜0.05）。但是,在整个试验期间,品种间无显著差异（P＜0.05）。（2）在两种猪的不同生长阶段（35日龄,80日龄,125日龄）MyoD mRNA都被检测到,MyoD基因在金华猪背最长肌中的表达量随着年龄体重的增加而增加,80日龄到125日龄阶段增加平缓。而MyoD基因在长白猪背最长肌中的表达量则与金华猪的恰恰相反,长白猪在出生后35日龄时水平较高,而后,随着年龄体重的增加而减少（P＜0.05）。在整个试验期间,品种间差异显著（P＜0.05）。35日龄时品种间差异极显著（P＜0.01）。（3）在两种猪的不同生长阶段（35日龄,80日龄,125日龄）MyoG mRNA都被检测到,金华猪背最长肌中MyoG基因的表达35日龄时较低,而后随着年龄和体重的增加而增加,但不同年龄阶段MyoG基因表达差异不显著。长白猪背最长肌中基因的表达则与金华猪相反,35日龄时较高,而后随着年龄和体重的增加而减少;同样,不同年龄阶段MyoG基因表达差异不显著。但是,在整个试验期间,35日龄品种间差异显著（P＜0.05）。本试验探讨了MSTN、MyoD和MyoG基因与肌肉沉积的关系,结果表明,MSTN基因表达水平与胴体瘦肉率呈反比;MyoD基因表达水平在金华猪背最长肌中随着年龄和胴体瘦肉率的增加而增加呈正比变化,而长白猪背最长肌中的表达恰好相反;MyoG基因变化规律与MyoD基因变化规律相似。从而MSTN、MyoD和MyoG基因对猪肌肉沉积具有显著影响。MSTN、MyoD和MyoG基因mRNA水平随着猪日龄的变化和显著变化,其中80日龄到125日龄阶段表达量变化平缓,表明在猪的整个生长阶段中肌细胞在不断的分化,在生长后期分化程度减缓。