前言 新生儿肺出血（NPH）是新生儿期常见危重症之一，起病急，早期不易发现，常常是多种严重新生儿疾病的临终表现，缺氧、感染、低体温是引起肺出血的主要原因。在我们前期的研究工作中，通过对新生大鼠肺出血的动物实验研究证实：低温缺氧后复温供氧可致新生大鼠肺出血；外源性内皮素-1（ET-1）可致新生大鼠肺出血并且推测外源性降钙素基因相关肽（CGRP）可以对此起到治疗的作用。CGRP是迄今为止发现体内已知的最强的扩血管肽，广泛的存在于中枢和外周神经系统中，尤其是在肺神经内分泌细胞（PNEC）和肺的神经纤维中，其扩张肺血管作用缓慢却持久且明显，在维持低肺血管张力中起重要作用。ET-1是迄今为止体内已知的最强大血管收缩物质，已证实肺中存在两种内皮素受体亚型：ET_A和ET_B受体，ET_A受体主要位于血管平滑肌和支气管平滑肌，介导血管、支气管收缩反应，在许多临床研究中，发现ET-1与肺动脉高压关系密切。同时也有实验证明CGRP和ET-1有相互拮抗的作用，本研究希望通过动物实验初步了解外源性CGRP能否预防性拮抗外源性ET-1致肺出血的作用。 材料与方法 1．新生Wistar二级大鼠40只（日龄4～5天）随机分成生理盐水对照组（A组）10只及实验组（B、C、D组）各10只，实验组外源性CGRP浓度分别为6.7×10^-10mol／L（B组）；6.7×10^-8mol／L（C组）；6.7×10^-6mol／L（D组），于气管插管后经气管导管滴人生理盐水及不同浓度CGRP各20μl，2小时后处死，观察肺组织大体改变及肺组织光镜改变，将肺出血程度分为五级：Ⅰ正常；Ⅱ肺水肿；Ⅲ点状肺出血；Ⅳ局灶性肺出血；Ⅴ弥漫性肺出血，了解CGRP与新生鼠肺出血的相关性。 2．在第一个实验基础上继续进行，生理盐水对照组（E组）；实验组外源性CGRP浓度分别为6.7×10^-10mol／L（F组）；6.7×10^-8mol／L（G组）；6.7 xlo一‘moFL（H组），每组在滴人cGRPI小时后继续滴人浓度为4x10一‘m0FL ET一1并继续观察2小时后处死动物，观察肺大体改变，将肺出血程度分为五级:方法同上，进一步用免疫组化方法测定各组肺组织中ET一1、eNOS的表达水平，并进行不同组间比较。实验结果 1.从浓度6.7 x 10一，omoFL一6.7 x 10一6 mol/L的外源性CGRP对新生大鼠肺组织均没有出血倾向的影响，其中B、C、D组各组间肺大体改变的比较差异无显著性（P>0.05）且与对照组（A组）组间比较差异无显著性（P>0 .05）。 2.在经不同浓度CGRP预处理的肺内滴人浓度为4 xlo一“m0FL ET一1后各组肺组织损伤程度比较:高浓度CGRP组（H组）损伤程度最轻，对照组（E组）肺出血最明显，损伤程度最重，H组的95%可信区间与E、F、G各组的95%可信区间都不重叠（P<0.05），H组与E、F、G各组差别均有统计学意义;而E、F、G各组的95%可信区间都有重叠（P>0.05），E、F、G各组差别均无统计学意义。 3.在经不同浓度CCRP预处理的肺内滴人ET一1后各组间肺组织中ET一1水平的比较:高浓度CGRP组（H组）的免疫组化强度较其他组都低，并且95%可信区间与E、F、G各组的95%可信区间都不重叠（P<0.05），其差别均有统计学意义。 4.在经不同浓度CGRP预处理的肺内滴人ET一1后各组间肺组织中eNOS水平的比较:高浓度CGRP组（H组）的免疫组化强度较其他组都高，并且95%可信区间与E、F、C各组的95%可信区间都不重叠（P<0.05），其差别均有显著意义。讨论 在证实了外源性CGRP不能导致新生鼠发生肺出血的基础上，本研究再次证实了外源性ET一1可以导致新生鼠发生肺出血，但预先给予一定浓度的外源性CGRP（6.7 xl。一6 m0FL）可以预防或减轻其肺出血的病理改变。推测其机制可能为: 1.浓度为6.7、10一“moFL的外源性cGRP经气道局部给药能够使肺组织中的内源性ET一1表达下降。从而使其收缩血管平滑肌和支气管平滑肌的作用减弱。 2.浓度为6.7 x 10一“moFL的外源性cGRP经气道局部给药可使血管内皮细胞eNOS表达增多，由于NO的强大的舒张血管、抑制血小板聚集等调节作用，从而使局部肺组织血管扩张。并且eNOS也能抑制ET一1的缩血管作用。 3.外源性cGRP可降低钙离子活性，降低肌丝细胞内ca，‘浓度，降的血管平滑肌对Ca，+的敏感性，从而对ET一1缩血管作用起到持续性的抑制。 4.cGRP可有效拮抗ET所致的血压升高，肺动脉和肠系膜动脉收缩，从而改善肺动脉的痉挛状态。 以上机制说明，外源性CGRP可通过对ET一1多方面的抑制作用，包括减少ET一1在肺组织的表达，增多eNOS在肺组织的表达，降低Ca，‘浓度及活性等来改善局部肺血管的痉挛，减少肺出血的发生。结论 1.滴人浓度为6.7 xlo一“m0FL一6.7 xlo一，“m0FL的外源性CGRP对常氧状态下支气管上皮完整的新生大鼠没有肺出血的影响。 2.经过预先使用浓度为6.7 xlo一6 m0FL的外源性CGRP处理的新生大鼠可以拮抗浓度为4.0 x 10一“的ET一1致肺出血的反应，低于上述浓度的CGRP对ET一1致肺出血无拮抗作用。 3.经浓度为6.7/10一‘moFL的外源性cGRP预处理后再由外源性E1’一1诱导肺出血的肺组织中免疫组化反应ET一l（irET一1）阳性强度明显低于其余各组，阳性表达率亦最低