背景:口腔诊室环境表面是微生物的储存库,大量致病微生物可通过交叉感染影响人体健康。由于临床操作的开放性和侵袭性等特点,增加了口腔诊疗过程中发生交叉感染的风险,因此,口腔诊室环境表面的感染防控问题受到公众的广泛关注。口腔诊室微生物群落特征与诊疗活动、人为因素等密切相关,但这些微生物在时间维度上的变化情况尚未得到充分探索,所以本研究旨在探讨口腔诊室环境表面微生物群落多样性特征及随时间变化趋势。目的:分析口腔诊室在不同使用时间的环境表面样本微生物多样性特征,揭示菌群随时间变化趋势及群落结构差异特点,探索诊室环境表面不同位点微生物演变规律,进而评估诊室环境表面微生物致病风险,为进一步完善口腔诊室环境表面微生物监测及感染防控措施提供理论依据。方法:对三间新装修的口腔内科诊室环境表面进行采样,包括诊室投入使用前（T0）、使用3个月（T1）及使用6个月（T2）三个时间点,每个时间点采集样本27个,共收集81个样本。利用扩增子测序（16S r RNA）揭示环境表面细菌群落组成特点,分析群落结构时间变化趋势;同时借助具有高物种分辨率的简化宏基因组测序技术（2b RAD-M）,基于种水平探讨样本中细菌、真菌、古菌的组成特点,并进一步验证环境表面微生物群落时间变化趋势。结果:（1）口腔诊室不同使用时间环境表面微生物注释发现:诊室投入使用不同时间环境表面优势菌门的相对丰度较稳定（p＞0.05）,以厚壁菌门（Firmicutes）、拟杆菌门（Bacteroidetes）、变形菌门（Proteobacteria）、放线菌门（Actinobacteria）、梭杆菌门（Fusobacteria）为主;在优势菌属中,乳杆菌属（Lactobacillus）的相对丰度随着诊室使用时间延长表现出显著逐步降低的趋势（p＜0.05）,而螺旋菌科NK4A136菌属（Lachnospiraceae NK4A136）和布劳特氏菌属（Blautia）的相对丰度仅在诊室使用6月时显著增加（p＜0.05）;在物种水平,同时发现了细菌、真菌、古菌的存在,以细菌为主,其相对丰度达99%以上。（2）微生物多样性及群落结构变化分析发现:随着诊室投入使用时间的延长,环境表面菌群物种丰富度及多样性均显著增加（p＜0.05）;诊室投入使用后（T1、T2）较使用前（T0）环境表面微生物群落结构更为相似（p＜0.05）。（3）诊室环境表面致病菌风险评估发现:总体条件致病菌指数（Microbial index of pathogenic bacteria,MIP）随着诊室投入使用时间的延长未发生显著变化（p＞0.05）,但与五官系统疾病相关的MIP值显著增加（p＜0.05）。与医院感染相关的11种致病菌中铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）、大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的相对丰度最高,且在所有环境表面样本中均检测到了铜绿假单胞菌。（4）口腔诊室环境表面各位点微生物转化网络分析发现:不同位点的菌群具有特定的关联和演化模式,综合治疗台靠背最有可能与其他位点实现菌群相互转化,而治疗台痰盂与其他位点进行菌群交换的可能性最小。结论:（1）口腔诊室环境表面呈现出丰富的微生物多样性。（2）诊室投入使用时间是影响环境表面微生物组成的重要因素,微生物多样性及群落结构受诊室使用时间的显著影响。（3）致病菌在口腔诊室环境表面持续存在,具有潜在交叉感染风险。（4）口腔诊室各位点微生物之间存在独特的演化与互作模式。