论文部分内容阅读
目的：本研究从Th细胞的异常分化的病理层面,观察寻常型银屑病血热证、血瘀证、血燥证患者JAK/STAT信号通路及其相关因子表达的差异性；从KC异常增殖和真皮毛细血管异常增生的病理层面,观察寻常型银屑病血热证、血瘀证、血燥证患者JAK/STAT信号通路及其相关因子表达的差异性。方法：临床入组寻常型银屑病患者共32例(部分患者仅参与外周血研究或仅参与皮肤组织研究),正常人受试者共12例,严格中医辨证分为血热证、血瘀证、血燥证三型,同时对受试者性别、年龄、病程、诱发因素、复发情况、加重季节、PASI评分、瘙痒评分等一般情况进行详细记录。以上述受试者为研究对象,我们运用流式细胞术检测各组受试者外周血中Th1、Th17细胞的分化比例差异,运用蛋白质印迹法(Western bolt)检测各组受试者外周血单一核细胞(PBMC)中pSTAT4/STAT4、pSTAT3/STAT3的表达差异,运用实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real time PCR)法检测各组受试者PBMC中T-bet、ROR-yt的表达差异；运用反转录聚合酶链式反应法(RT-PCR)法检测各组受试者组织中IL-22R1、JAK1、STAT3、C-myc、VEGF的表达差异,运用免疫组化法检测各组受试者组织中IL-22R1、JAK1、pJAK1、STAT3、pSTAT3、C-myc、VEGF的表达位置和含量差异。结果：(1)血热证银屑病患者外周血中Th1、Th17细胞分化比例升高,均明显高于正常人(p<0.01),Thl血热证高于血燥证(p<0.05),Th17血热证高于血瘀证、血燥证(p<0.05),且血热证银屑病患者Thl细胞升高与PASI评分呈显著正相关(r=0.90,p<0.01),与瘙痒评分呈正相关(r=0.83,p<0.05)。银屑病患者PBMC中通路因子pSTAT4/ST4、pSTAT3/STAT3表达量增加,血热证、血瘀证、血燥证均明显高于正常人(p<0.001),血热证又高于血瘀证和血燥证(p<0.01)。血热证银屑病患者PBMC中转录因子T-bet、RORyt的转录水平升高,明显高于正常人(p<0.001),同时高于血瘀证、血燥证(p<0.05)。(2)检测24例受试者外周血,Th1细胞分化比例、通路因子pSTAT4/STAT4表达、转录因子T-bet表达的相关性,结果显示Th1与T-bet呈正相关(r=0.42,p<0.05),Th1与pSTAT4/STAT4呈极明显正相关(r=0.69,p<0.001), pSTAT4/STAT4与T-bet呈极明显正相关(r=0.80,p<0.001)。Thl7细胞分化比例、通路因子pSTAT3/STAT3表达、转录因子ROR-yt表达的相关性,结果显示Th17与ROR-yt呈正相关(r=0.57,p<0.05),Th17与pSTAT3/STAT3的表达呈正相关(r=0.49,p<0.05), pSTAT3/STAT3与ROR-yt呈明显正相关(r=0.57,p<0.01)。(3)血热证银屑病患者皮损组织中,IL-22R1、JAK1、STAT3、C-myc、VEGF的基因转录水平均有增高,明显高于正常人(p<0.01),血燥证IL-22R1、JAK1、STAT3、 VEGF的基因转录水平高于正常人(p<0.05)。血热证银屑病患者皮损中IL-22R1、JAK1、 pJAK1、STAT3、pSTAT3、C-myc、VEGF的表达极显著高于血瘀证和正常人(p<0.001),血燥证IL-22R1、JAK1、pJAK1、STAT3、pSTAT3、VEGF表达均高于血瘀证和正常人(p<0.05),血瘀证STAT3、 pSTAT3表达高于正常人(p<0.05)。(4)检测24例受试者皮肤组织,IL-22R1、JAK1、STA3、C-myc、VEGF基因转录相互间均呈正相关(p<0.05), IL-22R1、JAK1、pJAK1、STAT3、pSTAT3、C-myc、 VEGF的表达呈显著正相关(p<0.001)。结论：(1)在Th细胞分化方面,外周血中JAK/STAT4、JAK/STAT3信号通路的活化使转录因子T-bet、RORyt的表达增加,并介导Th1、Thl7细胞分化比例增加；在KC增殖和真皮毛细血管增生方面,随着配体与通路特异性受体IL-22R1结合,JAK1/STAT3通路活化开放,下游因子C-myc、VEGF的蛋白表达水平也同时上调,这说明Th细胞分化、KC增殖和真皮毛细血管增生这些过程需要经过JAK/STAT信号转导通路实现。(2)在Th细胞分化、KC增殖和真皮毛细血管增生三个病理过程中,血热证银屑病患者的JAK/STAT信号转导通路都处于最为活跃的状态,而正是这种通路的活跃状态使得促炎症性Th1、Th17细胞高分化,进而使得KC细胞异常增殖,真皮毛细血管异常增生、迁曲扩张。JAK/STAT信号转导通路的异常活跃,可能是银屑病血热证形成的重要因素。且银屑病三大基本证型中,血热证是向血瘀、血燥证转变的枢机,可见JAK/STAT信号通路可能与血热证向血瘀、血燥证转变的过程相关。