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目的:构建过表达IP10的肝癌细胞株及过表达IP10的人脐静脉内皮细胞株,研究IP10对肝癌细胞行为学的影响及对肿瘤微环境的影响,并在小鼠体内实验中进一步验证IP10对肝癌的影响。方法:(1)采用慢病毒转染的方法,将过表达IP10的慢病毒及空载慢病毒分别转染肝癌细胞株SK-hep1及人脐静脉内皮细胞株HUVEC,嘌呤霉素进行筛选以获得稳定表达IP10的细胞株。(2)采用实时荧光定量PCR以验证IP10在转录水平上的表达,Western-blot法检测其在翻译水平上的表达,ELISA检测细胞培养上清中IP10的浓度。(3)采用CCK8检测IP10对肝癌细胞株SK-hep1增殖的影响,粘附性实验检测IP10对肝癌细胞株SK-hep1同质粘附及异质粘附的影响,Transwell法检测IP10对肝癌细胞株SK-hep1迁移、侵袭的影响。(4)采用CCK8检测IP10对人脐静脉内皮细胞HUVEC增殖的影响,流式法检测IP10对人脐静脉内皮细胞HUVEC周期的影响,Transwell法检测过表达IP10的肝癌细胞培养上清对T淋巴细胞的趋化作用。(5)构建小鼠皮下肝癌模型,到肿瘤生长达到约8mm时,瘤内分别注射PBS、空载慢病毒、过表达IP10慢病毒。观察肿瘤体积变化,及采用免疫组织化学法检测IP10、血小板-内皮细胞粘附分子CD31、M1型巨噬细胞中的特异性表面抗原CD86、T细胞表面标志物CD3的表达情况并采用流式检测法进一步检测肿瘤T淋巴细胞浸润情况。结果:(1)成功构建了稳定表达IP10的肝癌细胞株及人脐静脉内皮细胞株,通过嘌呤霉素筛选后在荧光显微镜下观察,细胞100%带绿色荧光。(2)实时荧光定量PCR及Western-blot检测显示SK-hep1-IP10及HUVEC-IP10细胞株中的IP10在转录水平和蛋白水平均较转染空载慢病毒和野生株高,此外,IP10能分泌到细胞培养基上清中。(3)CCK8检测细胞增殖实验结果显示IP10基因的过表达并不影响肝癌细胞株SK-hep1的增殖,细胞粘附实验显示,过表达IP10的细胞株较转染空载慢病毒的细胞株及野生株的同质粘附能力增强,而异质粘附能力减弱,Transwell检测细胞迁移、侵袭能力,结果显示IP10基因的过表达并不影响肝癌细胞株SK-hep1的迁移及侵袭。(4)CCK8细胞增殖实验结果显示过表达IP10的人脐静脉细胞株HUVEC的增殖能力较转染空载慢病毒的细胞株及野生株的低,即IP10能抑制人脐静脉内皮细胞的增殖,细胞周期结果显示细胞增长抑制在S期,Transwell检测T淋巴细胞趋化实验结果显示培养SK-hep1-IP10细胞株的细胞上清液对T细胞的趋化较空载组及野生组的多,即IP10可趋化T淋巴细胞的浸润。(5)成功构建小鼠肝癌模型,三组小鼠的肿瘤体积比较发现,注射过表达IP10慢病毒组的小鼠皮下肿瘤体积逐渐减小。免疫组织化学结果显示,注射过表达IP10慢病毒组中,肿瘤组织中的IP10、CD3的表达较其余两组增高,CD31较其余两组降低,而CD86变化不明显,流式检测肿瘤组织中淋巴细胞浸润情况,结果显示注射过表达IP10慢病毒组中CD4~+淋巴细胞及CD8~+的淋巴细胞均较对照组高。结论:(1)IP10是一个分泌蛋白,在SK-hep1-IP10及HUVEC-IP10两株细胞培养上清中均能检测到。(2)IP10可影响肝癌细胞的粘附性,但对肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭等作用不明显。(3)IP10可影响肿瘤微环境,在体内实验中促进淋巴细胞的趋化、抑制新生血管的生成。