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本课题以f2噬菌体作为试验病毒,通过噬菌斑计数试验、正交试验、单因素及双因素作用灭活病毒效果测定、透射电镜观察等方法筛选AO与UVA二者协同作用的最佳条件,观察AO与UVA对血浆中病毒的灭活效果及动力学规律。并通过自动生化检测、SDS-PAGE电泳、交叉免疫电泳、酶联免疫吸附法(ELISA)等方法,测定AO与UVA处理血浆的主要成分生物活性变化。 试验结果如下:1. 单独用AO消毒血浆时,在5~30 min的作用时间内,剂量为6μg/ml、7μg/ml、10μg/ml 的AO可分别使血浆中f2噬菌体下降3.27~4.53、4.99~5.75、6.11~7.53个对数级。2. 单独用UVA照射血浆时,剂量为4500J/m2~27000J/m2的UVA可使f2噬菌体下降1.21~2.63个对数级。3. 正交实验显示,在设计的剂量水平范围内,影响消毒效果的因素主要是AO的剂量,而UVA的照射强度、照射时间及芸香苷成分等因素的变化对其影响不显著。4. 经AO处理后再经UVA照射,能明显减少血浆中f2噬菌体的滴度,两因素的T/E值大于1,表明UVA与AO具有协同增效作用。AO(6μg/ml) 处理30min后再经UVA照射(4500J/m2),能使血浆中的f2噬菌体滴度下降6个对数级以上。5. 透射电镜观察显示,经有效灭活病毒的剂量处理(6μg/ml AO +4500 J/m2 UVA),与消毒前相比,血浆中大多数f2噬菌体由球形变为纺缍状和丝状,且轮廓变得不清晰,电子密度降低。6. 通过全自动生化分析、SDS-PAGE电泳、交叉免疫电泳、酶联免疫<WP=9>吸附试验等技术分析,加入芸香苷进行保护后,消毒血浆中主要蛋白质的含量、分子量、抗原活性、抗体活性及凝血因子的活性无显著变化,基本维持在正常值范围。结论与展望:1. 终浓度为6μg/ml的 AO 处理30min后,再经剂量为4500J/m2 UVA照射,血浆中f2噬菌体的灭活能达到6个对数级以上,在光淬灭剂(0.35mmol/L芸香苷)的作用下,血浆中主要蛋白的含量、分子量、生物活性无显著变化。AO与UVA的协同作用方法适用于血浆的病毒灭活。2. 由于时间的限制,本论文工作只初步探索观察了AO与UVA对血浆中f2噬菌体的灭活效果及血浆主要成分的生物活性变化。AO和UVA价廉且易得,将其运用于血浆中病毒的灭活,有极高的实用价值。因此急待进行进一步的相关问题的研究,以加快其实用步伐。有待研究的课题包括AO与UVA对其他非脂质包膜病毒、脂质包膜病毒的灭活作用;消毒后的血浆所致的急性、慢性、致癌动物试验;消毒后新免疫原性产生;消毒血浆的保存时间及其保存后的质量;消毒后AO的降解、清除方法研究等。