原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma简称肝癌)是我国最常见的恶性肿瘤之一。根据国家癌症中心最新公布的数据:我国肝癌新发病人数已达37.0万,死亡人数达到32.6万,高死亡率使得肝癌成为我国恶性肿瘤死亡人数第二位。目前多学科综合诊疗(multi-disciplinary team,MDT)的出现一定程度上提高了肝癌病人的总体预后,其中外科手术治疗依然是肝癌多学科综合诊疗中的主要治疗手段。而目前肝癌术后复发率高是影响肝癌病人术后生存质量加重病人疾病负担的主要因素。所以筛选出肝癌术后复发转移相关的分子标志物从而对肝癌病人进行术后复发转移预测评估,针对性的调整临床治疗策略可以有效提高病人预后减轻病人疾病负担。NEDD8是一个81个氨基酸组成的小分子,并和泛素同源度较高,在细胞内完成类泛素化neddylation修饰过程,目前有研究表明其在结肠癌、肾癌中呈高表达。此外虽有报道NEDD8与肝癌术后复发转移相关,并且可以通过HuR/MDM2通路调节肝癌细胞增殖,但对于其在肝癌复发转移中详细的分子机制目前并不明确,有待于进一步研究。目的:1.检测肝癌术后病人组织中NEDD8的表达,结合临床病理资料探讨NEDD8对预测肝癌术后复发转移风险评估的价值;2.检测NEDD8介导的类泛素化neddylation修饰过程对肝癌细胞的迁移侵袭及细胞干性的影响,探讨NEDD8对肝癌复发转移的作用及分子机制。方法:1.筛选出46例原发性肝细胞癌病人肝癌和癌旁组织构建组织芯片,并由免疫组化检测后分析其NEDD8蛋白表达水平,采用Kaplan-Meier法评估NEDD8预测肝癌术后复发转移的价值,使用Pearson卡方检验分析NEDD8与临床病理因素的相关性;2.用NEDD8抑制剂MLN4924处理肝癌细胞株后,先Western blot检测肝癌细胞株细胞内NEDD8蛋白及其介导的类泛素化neddylation修饰的改变,transwell小室实验检测肝癌细胞迁移侵袭能力的改变,划痕实验验证迁移能力改变,成球实验检测肝癌细胞株细胞干性变化,并通过Western blot检测细胞干性相关分子标志物的变化。结果1.NEDD8在肝癌中高表达而在癌旁中低表达(p<0.0001)。生存分析表明NEDD8高表达病人无复发生存期明显更低(p=0.023);COX多因素风险分析NEDD8是肝癌术后复发的独立风险因素(p=0.022),进一步分析肝癌组织中的NEDD8表达和临床病理因素相关性发现,在肝癌组织中和NEDD8的表达具有显著相关性的包括:肿瘤分化级别(p<0.001)、AFP(p=0.006);2.MLN4924抑制NEDD8介导特异性类泛素化neddylation过程后,肝癌细胞迁移侵袭能力明显被抑制,CCK8结果显示细胞的增殖也会受到抑制,成球实验和Western blot结果表明MLN4924抑制类泛素化neddylation之后肝癌细胞的干性会受到抑制,而且细胞的干性相关的分子标志物OCT4、Nanog、SOX2表达也会受到抑制,并且会抑制肝癌细胞EMT发生。结论:1.NEDD8在肝癌中高表达,与肝癌不良预后相关,是肝癌术后复发的独立危险因素,可以作为肝癌术后复发转移风险评估的潜在分子标志物;2.NEDD8介导的类泛素化neddylation修饰可以影响肝癌细胞的迁移侵袭能力,抑制肝癌细胞分化,而且还会促进肿瘤细胞EMT的发生。