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目的使用细胞免疫功能(Cylex Immuknow方法)监测肾移植术后受者体内CD4~~+T淋巴细胞内ATP水平,探讨其在肾移植术后的变化趋势和发生排斥反应、感染时的变化,以及其与免疫抑制剂血清药物浓度的相关性。同时监测肾移植术后T淋巴细胞亚群的变化,探讨两者联合应用对术后免疫功能监测以及在判断移植术后排斥与感染上的临床意义。方法第一部分,以49例肾移植受者为研究对象,10例健康志愿者作对照。全部受者术后22人肾功能稳定,15人发生排斥反应、12人发生感染。共收集标本n=227例,其中术前标本n=35例,稳定点标本n=163例,排斥点标本n=16例,感染点标本n=13例。使用Cylex Immuknow方法检测受者外周血中刺激后CD4~+T淋巴细胞内ATP水平;采用微粒酶联免疫法检测Tacrolimus(FK506)以及荧光偏振免疫法和CyclosporinA(CsA)血清药物谷浓度。比较并分析肾移植术后Immuknow值的变化趋势、排斥和感染时的变化情况、与免疫抑制药物血清浓度的相关性。第二部分,以27例在我院行肾移植手术的受者为研究对象,分别于术前、术后7天、14天、21天、30天、3月、6月、1年,及发生感染和(或)排斥反应时采集外周血样本,同时检测T细胞亚群及Immuknow值。分析肾移植受者术后发生感染和(或)排斥时两种指标的变化情况,进一步分析两者联合应用对肾移植术后患者感染和排异的鉴别诊断价值。结果第一部分:(1)肾移植受者术前测得Immuknow均值为267.9±121.4ng/ml,稳定点为365.6±184.8ng/ml,感染点为174.5±71.69ng/ml,排斥点为445.9±246.4ng/ml,健康志愿者为277.0±92.57ng/ml,男性为291.7±113.5ng/ml,女性为247.6±12.29ng/ml。(2)感染点Immuknow值显著低于正常对照组、术前点以及稳定点值(均P<0.05),感染受者感染点Immuknow值显著低于自身术前值(P<0.05)。(3)排斥点Immuknow值显著高于术前点和正常对照组数值,差异有统计学意义(均P<0.05);排斥点数值虽高于稳定点,但差异无统计学意义(P>0.05),排斥受者排斥点Immuknow值显著高于自身术前值(P<0.05)。(4)Immuknow测得的ATP值与同期测得血清药物谷浓度没有相关性(均P>0.05)。(5)从肾移植后稳定点Immuknow值的变化趋势来看,肾移植术后3周、1月、2月的Immuknow值均明显高于术前,差异有统计学意义(均P<0.05),说明肾移植受者术后短期内免疫功能处于较高的状态且不稳定,需要加强受着免疫功能监测。第二部分:(1)27例受者中收集术前点标本27例、稳定点标本96例,对同一受者术前点数值分别与术后7d、14d、21d,随访1月、3月、6月、1年的平均T淋巴亚群结果进行配对设计t检验。结果显示CD3~+、CD8~+、CD69~+T淋巴细胞百分比以及CD4~~+/CD8~+比值在移植后稳定点在术前与术后7d、14d、21d,随访1月、3月、6月、1年之间的变化无统计学意义(均P>0.05);CD4~~+T淋巴细胞百分比在术后2周及1月明显高于术前(均P<0.05);CD25~+淋巴细胞百分比在术1周以及2周明显高于术前,差异具有统计学意义(均P<0.05);CD4~~+CD25~+CD127lowT淋巴细胞百分比在术后1月明显高于术前(P=0.014);CD4~~+T淋巴细胞绝对计数在术后2周、3周和1月高于术前差异显著(均P<0.05);CD25~+淋巴细胞绝对计数在术后1周、2周和3周,明显高于术前差异显著(均P<0.05);CD4~~+CD25~+CD127lowT淋巴细胞绝对计数在术后1周、2周、3周、1月和3月明显高于术前,差异显著(均P<0.05)。(2)收集排斥点标本7组,排斥点CD69~+百分比及绝对计数显高于稳定点,差异有统计学意义(P<0.05);排斥点CD4~~+CD25~+CD127low百分比及绝对计数明显低于稳定点,差异具有统计学意义(P<0.05);排斥受者排斥点测得值与自身术前的比较显示排斥点仅有CD25~+计数与CD69~+计数明显高于术前,CD4~~+CD25~+CD127low绝对计数明显低于术前,差异显著(均P<0.05)。(3)收集感染点标本9组,感染点CD4~~+T淋巴细胞百分比以及其绝对计数低于稳定点,CD25~+T淋巴细胞绝对计数、CD69~+T淋巴细胞绝对计数低于稳定点数值,差异有统计学意义(均P<0.05),感染受者感染点测得值与自身术前值比较显示感染点CD4~~+计数明显低于术前,差异显著(P<0.05)。(4)Immuknow测得的ATP值与同期测得的CD4~~+T淋巴细胞绝对计数呈正相关(r=0.44,P<0.01)。结论(1)使用Immuknow方法监测受者的CD4~~+T细胞免疫状态,能弥补药物浓度监测的不足,提前预测排斥反应及感染的发生,指导临床调整免疫抑制剂的应用;(2)CD4~+、CD25~+、CD69~+T淋巴细胞在排斥反应以及感染的判断方面存在一定意义;受者体内Treg细胞水平能够预判排斥反应发生。(3)联合T淋巴细胞亚群监测,可以进一步提高Immuknow在肾移植术后排斥以及感染诊断中的临床应用价值