二苯乙烯苷（2,3,5,4’-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside, THSG）是何首乌（Polygonum multiflorum Thunb.）的主要有效成分，具有抗炎、抗氧化、调节血脂、抗肿瘤、安神、预防和治疗阿尔茨海默症作用。目前二苯乙烯苷研究集中在提取和药理方面，对二苯乙烯苷的生物合成路径未见报道，因此二苯乙烯苷的合成路经值得研究。首先获得何首乌愈伤组织，然后建立何首乌悬浮细胞系。利用普通前体饲喂和稳定同位素前体示踪何首乌悬浮细胞，通过HPLC-MS/MS进行检测，根据检测结果推测二苯乙烯苷生物合成路径。本文主要研究结果如下：（1）通过正交实验获得何首乌愈伤组织的诱导培养基：含有1mg·L^-12,4-D和0.4mg·L^-1NAA的MS培养基。在此培养基中，15天就能诱导出愈伤组织，愈伤组织的诱导率为96.7%。检测了何首乌根、茎、叶的愈伤组织诱导效果和二苯乙烯苷的含量，发现何首乌根、茎和叶都能诱导出愈伤组织，其中根诱导出的愈伤组织中二苯乙烯苷含量最高，为1.5mg·g^-1，因此选择二苯乙烯苷含量高的根愈伤组织进行培养。何首乌愈伤组织比较致密，不能进行悬浮细胞培养。通过把何首乌愈伤组织接入液体MS培养基中培养4天，然后转接到含有不同植物生长激素的固体MS培养基中进行培养，获得了疏松易碎的愈伤组织，通过实验获得适合何首乌疏松愈伤组织生长的植物生长激素配比：0.2mg·L^-16-BA和0.5mg·L^-1NAA。（2）比较了何首乌在MS、B5和N6培养基生长的效果，发现MS培养基是何首乌液体最佳生长培养基，在此培养基中生长的细胞干重和二苯乙烯苷含量分别为6.35g·L^-1和42.23mg·L^-1，因此选择MS培养基作为何首乌悬浮培养基。（3）通过把悬浮细胞铺在平板上，培养30天后，挑选生长快的小细胞团转接到新的平板继续培养，然后每隔15天转接一次，共转接6次，检测不同细胞团的二苯乙烯苷含量，最终获得高含量二苯乙烯苷的细胞系，此高含量何首乌悬浮细胞的干重和二苯乙烯苷的含量分别达到7.46g·L^-1DW和56.23mg·L^-1，而原细胞系悬浮细胞的干重和二苯乙烯苷含量分别6.55g·L^-1DW和43.39mg·L^-1，此高含量细胞系悬浮培养干重比原细胞系提高了13.89%，二苯乙烯苷含量比原细胞系提高了29.59%。通过发酵条件优化，获得何首乌悬浮细胞系最佳的培养条件为100rpm、26℃暗培养16天。（4）为了筛选二苯乙烯苷合成路径的前体和饲喂研究，在何首乌悬浮细胞培养的第10天，在何首乌悬浮细胞MS培养基中分别加入不同浓度的苯丙氨酸，发现添加60mg·L^-1的苯丙氨酸时何首乌悬浮细胞中二苯乙烯苷含量最高，达到105.15mg·L^-1，比没有加苯丙氨酸的对照组(55.23mg·L^-1)增加了90.38%，这说明苯丙氨酸能增加二苯乙烯苷含量，可能是二苯乙烯苷的前体。在何首乌悬浮细胞培养基中分别加入不同浓度的肉桂酸，发现添加40mg·L^-1的肉桂酸时何首乌悬浮细胞达到最大二苯乙烯苷含量：123.03mg·L^-1，比没有加肉桂酸的对照组(55.23mg·L^-1)增加了122.76%，这说明肉桂酸能增加二苯乙烯苷含量，可能是二苯乙烯苷的前体。在何首乌悬浮细胞培养基中分别加入不同浓度的乙酸钠，发现添加20mg·L^-1的乙酸钠，何首乌悬浮细胞能达到最大二苯乙烯苷含量：89.08mg·L^-1，比没有加乙酸钠的对照组(55.23mg·L^-1)增加了61.29%，这说明乙酸钠能增加二苯乙烯苷含量，可能是二苯乙烯苷的前体。在液体MS培养基中分别加入不同浓度苯丙氨酸、肉桂酸和乙酸钠的混合前体，发现添加40mg·L^-1的肉桂酸和20mg·L^-1乙酸钠，何首乌悬浮细胞二苯乙烯苷含量最大：162.65mg·L^-1，比对照组(55.23mg·L^-1)增加了194.50%，说明混合前体效果最好。（5）在何首乌液体MS培养基中加入U^-13C9苯丙氨酸示踪，通过HPLC-MS/MS检测，¹³C标记的苯丙氨酸能结合进入二苯乙烯苷，这确证了苯丙氨酸是二苯乙烯苷的前体。在何首乌液体MS培养基中加入U^-13C9肉桂酸示踪，通过HPLC-MS/MS检测，¹³C标记的肉桂酸能结合进入二苯乙烯苷，这确证了肉桂酸也是二苯乙烯苷的前体，并且示踪实验证明了我们假定的二苯乙烯苷合成路径。根据以上结论，我们证明了何首乌二苯乙烯苷的生物合成路径：苯丙氨酸作为前体，在苯丙氨酸解氨作用下合成肉桂酸，再经过几步反应合成二苯乙烯苷。