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CD分子抗体是医学检验中常用的抗体分子,应用于多种疾病的临床辅助诊断,特别是AIDS和白血病的主要诊断手段,在临床上应用十分广泛。同时抗CD分子抗体也是细胞培养研究中的重要辅助工具,作为淋巴细胞的表面标志大量应用于流式细胞仪,本实验的目的是制备抗人淋巴细胞的单克隆抗体,从中筛选鉴定抗CD4分子的单克隆抗体。
利用人淋巴细胞免疫的Bal/c小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞系SP2/0融合,得到稳定分泌抗人淋巴细胞的杂交瘤细胞,共获得40株能稳定分泌抗体的细胞株,其中30株细胞分泌的抗体亚类为IgM,7株为IgG,1株为IgG2a,2株为IgG2b,40株细胞分泌的抗体轻链均为k型。
采用rProteinA一步亲和层析法纯化了10株IgG型杂交瘤细胞制备的腹水,得到纯品抗体。纯品抗体经鉴定,分子量在149.36-157.23kD之间,抗体纯度在96%以上。
通过10个纯品抗体与相同包被浓度的CD4,CD8重组抗原进行反应,筛选得到抗体株12H5b2,其与CD4反应,与CD8没有交叉反应,并通过Western Blot进一步证实。
通过本实验,成功地制备了抗人淋巴细胞的单克隆抗体,并从中成功地筛选出了1株特异性较好的抗CD4分子的杂交链细胞株12H5b2,这些抗体的研制为下一步研发试剂盒或应用于临床诊断奠定了基础。