【摘 要】
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鸽源禽毛滴虫（Trichomonas gallinae）,简称鸽毛滴虫,是寄生于鸽上消化道并导致宿主发生鸽毛滴虫病的一种鞭毛原虫,呈世界范围内流行分布。鸽毛滴虫感染能力强,不仅可感染所有品种的鸽,也可感染家禽、火鸡、野鸟等;主要引起感染鸽口腔、食道、嗉囊等上消化道坏死性溃疡、梗阻,造成进食、饮水、呼吸困难,生长滞缓,甚至死亡,每年给养鸽业造成严重损失。山东省是肉鸽养殖大省,呈现区域性集约化养殖特点
【基金项目】
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山东省自然基金面上项目（ZR2020MC179）; 山东省重大科技创新工程项目（2019JZZY010735）
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鸽源禽毛滴虫（Trichomonas gallinae）,简称鸽毛滴虫,是寄生于鸽上消化道并导致宿主发生鸽毛滴虫病的一种鞭毛原虫,呈世界范围内流行分布。鸽毛滴虫感染能力强,不仅可感染所有品种的鸽,也可感染家禽、火鸡、野鸟等;主要引起感染鸽口腔、食道、嗉囊等上消化道坏死性溃疡、梗阻,造成进食、饮水、呼吸困难,生长滞缓,甚至死亡,每年给养鸽业造成严重损失。山东省是肉鸽养殖大省,呈现区域性集约化养殖特点。本研究旨在了解山东省主要肉鸽养殖场鸽毛滴虫感染现状、基因类型、培养特性和致病特点,为鸽毛滴虫的深入研究和临床防控提供科学依据。首先,从山东省8个地市主要肉鸽养殖场采集咽拭子,采用培养法,镜检检测鸽毛滴虫感染情况,并经体外培养分离、涂片、瑞氏姬姆萨染色、形态鉴定获得鸽毛滴虫分离株;其次,每个地区随机选取三株虫株,PCR扩增ITS基因和AP65基因,测序,生物信息软件分析基因同源性,并构建基因进化树,确定虫株基因型。第三,对不同基因型的虫株进行体外培养,设不同p H值（p H1.5、p H 3.9、p H 6.3、p H9.8、p H12.6）、不同血清浓度（1%、5%、10%、15%、20%）、不同温度（28℃、33℃、37℃、42℃、47℃）条件进行虫株生长增殖速度比较,分析分离虫株的培养特性。第四,对分离虫株进行不同条件下复壮培养,经口感染1月龄人工饲喂无毛滴虫幼鸽,组织切片染色观察病变损伤;利用免疫组化技术、扫描电镜、透射电镜检测虫体寄生状态,分析致病特点。结果显示:山东省8个地市主要肉鸽养殖场均检测出鸽毛滴虫,个体阳性率为82.78%（601/726）;其中,幼龄鸽阳性率为81.03%（188/232）,后备鸽阳性率为86.74%（229/264）;保姆鸽带虫率为80%（184/230）。对8个地市24株鸽毛滴虫株ITS基因分型结果显示,基因A型虫株为21株,占比87.5%,基因B型虫株为1株,占比4.17%,基因T型虫株为2株,占比8.33%;AP65基因同源性和进化树显示,分离的虫株分属两大分支,济南天桥区A型虫株与聊城鸽场2株基因T型虫株在同一个进化分枝上,其余虫株在同一进化分支上。分离的基因型为A、B两虫株在基础HF培养液条件下,0 h～12 h生长增殖速度没有差异,在12 h～20 h基因型A虫株生长速度略快于基因型B虫株;基因A型和基因B型鸽毛滴虫倍增时间分别为3.77、3.89h,不存在差异;不同p H值条件下结果显示,p H6.3时两个基因型的虫株生长增殖速度显著大于其它p H值条件的增殖速度,p H＜3.9或＞9.8均导致虫株增殖减缓或停止生长。血清浓度为10%显著促进两种基因型的虫株快速增殖,并维持较长时间虫体高密度状态,血清浓度为1%和5%初期（0 h～16 h）也显著促进虫株快速增殖,但难以维持虫体高密度状态,而血清浓度15%和20%时两种虫株几乎不增殖。温度条件为37℃和42℃时,两种虫株增殖速度显著快于其它温度条件,大于47℃或小于28℃时,几乎不增殖。采用了鸡胚尿囊腔接种、鸭胚尿囊腔接种、DF-1细胞接种以及Vero细胞接种等方式复壮毛滴虫,四种方法中只有Vero细胞接种毛滴虫的方法未能成功复壮鸽毛滴虫。利用鸡胚尿囊腔接种复壮的鸽毛滴虫成功感染1月龄白羽王人工饲喂无毛滴虫鸽,食道组织免疫组化结果显示鸽毛滴虫在鸽食道粘膜表面寄生;食道病理切片未发现明显的病理变化;鸽食道及鸽毛滴虫扫描电镜和透射电镜结果显示鸽毛滴虫粘附状态和食道粘膜微绒毛短而杂乱的病理损伤。综上,山东省8个地市肉鸽主要养殖场鸽毛滴虫感染较为普遍,存在以A型为主的多个鸽毛滴虫基因型,培养条件p H6.3、血清浓度为10%、温度为37℃～42℃时鸽毛滴虫分离株生长增殖最佳,可通过鸡胚尿囊腔接种、鸭胚尿囊腔接种、DF-1细胞接种复壮鸽毛滴虫,针对1月龄幼鸽有易感性。
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