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背景与目的较多研究发现血清微小RNA(microRNA,miRNA)在疾病诊断或疗效判断中具有重要的潜在价值。我们的前期研究发现严重抑郁症患者脑脊液和血清中miRNA-221-3p(miR-221-3P)相对含量均明显高于正常个体,可作为临床抑郁症患者血清中的生物学标志。但到目前为止,血清中miR-221-3P含量升高多少对辅助判断围术期抑郁情绪有意义并不清楚。因此,本实验拟首先测定围术期不同抑郁情绪状态的患者血清miR-221-3P相对含量。在此基础上,通过构建miR-221-3p的标准品,检测无抑郁个体、抑郁情绪患者血清中miR-221-3p的绝对含量,最后对血清miRNA-221-3p含量与患者抑郁情绪行相关性分析。通过此研究,希望进一步明确检测血清miR-221-3p含量在辅助判断围术期抑郁情绪中的潜在价值和意义。方法1.收集符合条件的患者围术期血清,行PHQ-9抑郁量表评分,根据评分值分为无抑郁组、轻度抑郁情绪组、中度及以上抑郁情绪组。2.利用实时荧光定量PCR技术测定患者血清miR-221-3p相对含量。3.提取样品血清总RNA,用特异性miRNA-221-3p引物反转录获得cDNA。通过PCR获得含有miRNA-221-3p的DNA片段,然后置入到pcDNA3.1质粒中。经测序确定重组质粒pcDNA3.1(pcDNA3.1-miR-221-3p)构建正确。通过PCR从pcDNA3.1-miR-221-3p中获得含有T7启动子和miR-221-3p的基因片段,然后用体外转录得到miRNA-221-3p的标准品,最后计算出标准品的浓度(copies/μgRNA)。4.取miRNA-221-3p标准品反转录进行梯度稀释实时荧光定量PCR,根据标准品的浓度和Ct值绘制标准曲线。5.根据标准曲线计算样品血清miR-221-3p浓度,并分析与患者围术期抑郁情绪评分的相关性。结果1.三组患者年龄、性别、手术时间、麻醉时间、失血量及VAS评分均无统计学差异(P>0.05);2.PHQ-9抑郁评分轻度以上患者血清miR-221-3p的相对含量较无抑郁组明显升高(P<0.05),轻度抑郁情绪患者血清miR-221-3p的相对含量较无抑郁组高2.21倍,中至及以上抑郁情绪患者血清miR-221-3p的相对含量较无抑郁组高3.66倍。3.miRNA-221-3p重组质粒构建成功,体外转录得到纯化的miRNA-221-3p标准品,计算出标准品拷贝数为1.27*1012copies,浓度为8.39*1012copies/μgRNA。4.标准品梯度稀释实时荧光定量PCR得到的标准曲线公式为:Y=3.49214E+12e-0.5871X,相关系数R2=0.9999,X代表Ct值,Y代表样品的含量(copies)。5.血清miR-221-3p绝对含量与患者围术期PHQ-9抑郁评分相关性分析发现患者围术期血清miR-221-3p含量>1.7*107copies/μgRNA时,患者抑郁评分均在6分及以上。结论1.患者围术期抑郁情绪状态血清miR-221-3P相对含量均明显高于正常。2.血清miR-221-3p浓度>1.7*107copies/μgRNA可作为判断患者围术期抑郁情绪的生物学标志之一。