背景:Toll样受体4（TLR4）属于模式识别受体,通过识别脂多糖（LPS）,诱导细胞内信号传导募集衔接子蛋白My D88和Toll受体相关的干扰素激活剂（TRIF）,激活My D88依赖及非依赖性信号通路,促使NF-κB核易位,激活炎性细胞因子转录,以级联的方式加重炎症反应。因此,调控和干扰TLR4/My D88通路的关键蛋白和炎性因子对治疗炎症具有重要意义。炎症是生物体对感染或组织损伤的自身免疫反应,其特征是局部组织中细胞的变性和坏死。随着炎症的发展,可诱发糖尿病,骨关节炎和类风湿关节炎等疾病,严重影响人类身体健康。目前非甾体抗炎药（NSAIDs）,常用于疼痛和炎症的治疗。虽疗效显著,但临床发现长期使用会产生毒性和副作用,如引发心肌梗塞和药物超敏反应,引起胃肠道损害、出血、溃疡等。因此,寻找安全、有效、低毒的消炎药仍是药物开发研究的热点。丹皮酚具有显著抗炎活性,主要通过抑制炎性因子的生成发挥功效。课题组前期研究发现:烷基取代丹皮酚2位羟基氢,碳链越长,抗炎活性越强;脲类化合物越来越多地应用于药物设计和药物化学中,如氨基脲类化合物,可作为5-脂氧合酶（5-LOX）抑制剂,β-阻滞剂或MDM2拮抗剂,具有抗寄生虫,抗惊厥,抗病毒,抗癌和抗菌活性;卤素,一方面作为吸电子基团,能提高化合物的生物活性,另一方面位于苯基脲的邻位,与氧原子相互排斥形成构象约束,有利于脲基与氢键结合,使得化合物生物活性增强。因此,根据分子杂合理论,本课题以丹皮酚为先导物,醚化引入碳链、苯基脲和卤素,设计合成系列丹皮酚醚化脲类衍生物,通过LPS诱导RAW264.7巨噬细胞建立炎症模型,筛选抗炎效果更显著的候选药物。目的:以抗炎活性显著的丹皮酚为先导物,醚化引入碳链、苯基脲和卤素,设计合成系列丹皮酚醚化脲类衍生物;通过检测LPS诱导RAW264.7巨噬细胞炎性因子NO,TNFα和IL-1β,筛选抗炎活性显著的候选化合物,并建立构效关系。候选物,通过q RT-PCR、吞噬、ROS免疫荧光、线粒体膜电位、NF-κB蛋白免疫荧光实验,开展抗炎活性研究;通过TLR4/My D88信号通路开展抗炎机制研究。构效关系的建立,为今后丹皮酚抗炎药物的设计合成提供思路和理论依据。方法和结果:（1）丹皮酚醚脲化类衍生物的设计合成。以丹皮酚为先导物,通过取代反应、醚化反应、氨基脱保护反应和成脲反应,合成32个丹皮酚醚化脲类衍生物。通过MS、~1H-NMR、13C-NMR进行结构表征,确定化合物结构。（2）丹皮酚醚化脲类衍生物对炎性因子的抑制作用及其构效关系研究。选取RAW264.7巨噬细胞,通过MTT实验,明确各化合物IC50和对细胞无杀伤性浓度。化合物处理后经LPS刺激,收集细胞上清液,分别通过化学试剂法和酶标法检测清液中NO和TNFα,IL-1β的表达水平,明确丹皮酚衍生物的体外抗炎能力,探讨构效关系。结果表明,碳链的延伸使得化合物对LPS诱导巨噬细胞炎性因子NO,TNFα和IL-1β的抑制能力增强;引入苯基脲,化合物抑制LPS诱导巨噬细胞炎性因子NO,TNFα和IL-1β的能力增强;卤素取代苯环上的氢,化合物抑制炎性因子的能力进一步增强。筛选得到显著抑制LPS诱导巨噬细胞炎性因子NO,TNFα和IL-1β的丹皮酚醚化脲类衍生物（化合物b16）。（3）丹皮酚醚化脲类衍生物对LPS诱导巨噬细胞的抗炎机制研究。选取显著抑制LPS诱导巨噬细胞炎性因子NO,TNFα和IL-1β的丹皮酚醚化脲类衍生物（化合物b16）,通过q RT-PCR、吞噬、ROS免疫荧光、线粒体膜电位、NF-κB蛋白免疫荧光、Western Blot实验开展抗炎活性和机制研究。结果表明,化合物b16抑制LPS诱导巨噬细胞炎性因子生成、增强巨噬细胞吞噬能力、抑制活性氧增加、逆转细胞线粒体膜电位下降、抑制细胞NF-κB核易位、通过TLR4/My D88信号通路抑制炎性因子生成。结论:以抗炎活性显著的丹皮酚为先导物,醚化引入碳链、苯基脲和卤素,合成丹皮酚醚化脲类衍生物。实验表明,醚化引入碳链、苯基脲和卤素后,衍生物对LPS诱导巨噬细胞炎性因子NO,TNFα和IL-1β的抑制能力增强。丹皮酚醚化脲类衍生物（化合物b16）显著抑制LPS诱导巨噬细胞炎症反应。