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通过对初诊和随诊患者AML1-ETO转录本表达水平检测,确立RQ-RT-PCR的敏感度,准确性和特异性,选择适当的表达方式,与巢式PCR进行比较,初步分析一些临床资料与融合基因表达的关系.最终,建立了一整套利用RQ-RT-PCR方法对AML1-ETO+AML患者的微小残留病(mininal residual disease,MRD)监测和临床分析方法.方法:利用RQ-RT-PCR方法,分析2000.8-2004.1期间在该院诊断的28例AML1-ETO+AML患儿.RQ-RT-PCR方法的荧光化学物质为Taqman荧光探针,分别对融合基因AML1-ETO和对照基因GAPDH进行检测.利用分子克隆的方法建立AML1-ETO及GAPDH的质粒标准品,对其10倍系列稀释后确定PCR敏感度;用患者样品RNA10倍梯度稀释后,确定MRD敏感度.检测28例患者初诊时AML1-ETO融合基因表达量,并对1 7例患者进行动态检测.分析初诊时患者的融合基因AML1-ETO表达量与临床因素的关系;分析初诊时和随诊时患者的融合基因AML1-ETO表达量与远期预后的关系.与巢式PCR方法进行比较.检测结果应用SPSS forWindows 10.0软件包进行统计学处理,采用独立样本t检验,Kaplan Meier生存分析,Cox回归分析.结论:1.首次成功应用实时定量PCR技术,对儿童AML1-ETO+急性粒细胞白血病患者初诊和治疗时AML1-ETO融合基因的动态观察.2.RQ-RT-PCR技术其PCR敏感度达到5拷贝/μl,MRD敏感度达到万分之一(10-4).尽管其敏感度较巢式PCR稍低,但污染少,快速,准确,更适合应用于MRD的定量监测.无病生存时间大于2年的患者MRD的检测均为阴性.3.往往复发患者较初诊患者的AML1-ETO融合基因的表达量高.4.该研究发现初诊时AML1-ETO融合基因高表达组患者的EFS及OS分别为66.67％和73.33％,较低表达组相对较低,但差异无统计学意义,需加大样本含量分析.