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第一部分CLEC-2过表达/siRNA慢病毒载体的构建及其瞬时转染树突状细胞 目的：构建C型凝集素受体（C-type lectin receptors,CLRs）CLEC-2过表达/siRNA慢病毒（lentivirus）载体，并将其瞬时转染树突状细胞（Dendritic Cell,DC）。 方法： 1.免疫磁珠分离、培养以及鉴定胎盘和蜕膜来源的DC； 2.构建CLEC-2过表达/siRNA慢病毒载体并转染DC； 3.抽提转染CLEC-2过表达/siRNA慢病毒后的DC的总RNA； 4.Real-Time PCR检测DC转染慢病毒前后的CLEC-2基因mRNA表达量。 结果： 1.从胎盘分离纯化得到的DC，经流式细胞术检测其纯度为（82.6±2.4）％； 2.根据Genebank数据库成功构建了过表达CLEC-2基因慢病毒及CLEC-2基因siRNA慢病毒，病毒量为1×1010Unit；3.将构建的两种慢病毒转染DC后，在荧光倒置显微镜下可观察到：被转染的阳性细胞有绿色荧光蛋白（GTP）表达，通过流式细胞仪检测,转染效率分别为85%及82%左右；4.Real-Time PCR检测发现过表达CLEC-2基因慢病毒转染DC后mRNA相对含量均值为（14.26±0.47）%，较空白未转染的DC表达量（（1.67±0.19）%）有明显上升（P<0.01）；CLEC-2基因siRNA慢病毒转染DC后CLEC-2的mRNA相对含量均值为（0.03±0.01）%，较空白未转染的DC表达量明显下降（P<0.01）。 结论： 1.成功构建了表达人CLEC-2-siRNA的慢病毒载体，它能有效沉默CLEC-2基因在胎盘DC中的表达并获得了其瞬时转染的DC； 2.成功构建了过表达CLEC-2的慢病毒载体，它能有效的在体内发挥基因过表达效应并获得了其瞬时转染的DC。 第二部分树突状细胞表面CLEC-2表达差异对滋养细胞生物学行为的影响 目的：采用基因克隆技术构建CLEC-2过表达/siRNA慢病毒载体，观察胎盘来源的树突状细胞（DC）表面CLEC-2过表达或低表达对人绒毛外细胞滋养细胞（extravillous cytotrophoblasts，EVCT）侵袭力、粘附力及凋亡率的影响。 方法： 1.通过质粒转染和RNA干扰技术获取过表达CLEC-2的DC和低表达CLEC-2基因的DC； 2.分离、培养以及鉴定人原代绒毛外细胞滋养细胞，然后与过表达CLEC-2基因的DC和低表达CLEC-2基因的DC共培养； 3.体外侵袭试验，检测共培养前后的滋养细胞侵袭能力；Annexin V/PI双染法检测共培养前后滋养细胞的凋亡情况；粘附能力实验检测共培养前后滋养细胞的粘附能力。 结果： 1.侵袭能力：EVCT与过表达CLEC-2基因的DC及T、自然杀伤细胞（Natural killer cells，NK）共培养后侵袭能力与对照组相比无显著性差异（P>0.05）；而EVCT与低表达组的DC及T、NK细胞共培养后侵袭能力明显弱于对照组，（P<0.01）； 2.凋亡率：EVCT与过表达组的DC及T、NK细胞共培养后凋亡率为（3.9±0.8）%，与对照组的凋亡率（1.1±0.3）%相比无显著性差异。而EVCT与低表达组的DC及T、NK细胞共培养后凋亡率为（8.2±1.4）%，与对照组相比，凋亡率明显增加（P<0.01）； 3.粘附能力：过表达组EVCT粘附能力为对照组的（94.2±2.3）%，而低表达组为对照组的（52.8±1.5）%，EVCT粘附能力显著下降（P<0.01）。 结论：抑制DC表面CLEC-2表达可使EVCT的侵袭能力及粘附能力显著减弱、凋亡率显著增加，提示DC表面CLEC-2表达异常可能是滋养细胞免疫损伤和子痫前期发病的重要机制之一。