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心、脑血管疾病是目前人类死亡的主要原因之一,动脉粥样硬化是冠状动脉、脑动脉等重要血管疾病的病理基础。随着其发病率及死亡率不断上升,动脉粥样硬化正成为心血管疾病中的热点问题而引起人们的广泛关注。对于本病的发病机制,最早提出的是脂肪浸润学说,其后又提出血小板聚集和血栓形成学说,后来又提出了动脉粥样硬化的损伤反应学说,认为本病的各种危险因素最终都会损伤动脉内膜,动脉粥样硬化斑块的形成是动脉内膜对损伤作出反应的结果。随着研究的不断深入,ROSS教授在该学说的基础上,又提出“动脉粥样硬化是一种炎症性疾病”的炎症学说。ROSS认为动脉粥样硬化是动脉壁的一种炎症性疾病,它的形成是血管内皮细胞、单核细胞、血管平滑肌细胞与炎症介质相互作用的结果,以粥样斑块内出现单核细胞、巨噬细胞和T淋巴细胞为特征。炎症反应贯穿于整个动脉粥样硬化的发生、发展过程中,乃至可以进一步引起心血管事件的发生。在动脉粥样硬化的起始阶段,许多因素可以引起动脉壁的炎症反应,其中ox-LDL是一个重要的促炎物质,它可以引起许多炎性相关基因的表达。这些基因表达的产物如粘附分子、趋化因子等可以促使局部单核细胞聚集、活化,并通过相应的配体与动脉粥样硬化斑块处的血管内皮细胞粘附,迁移到内皮下,激活并分泌一些细胞因子进一步促进动脉粥样硬化的发展。他汀类(Statins)药物属于3-羟-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶抑制剂,可以降低血液胆固醇的水平,是治疗高脂血症和动脉粥样硬化的药物中最有效的一类。越来越多的证据显示,他汀类药物能够降低心脑血管疾病的发病率和死亡率不仅仅依靠其降脂作用,除此之外还有多种其它的药理作用,例如改善血管内皮、促进纤溶、抗血栓形成等。近年来,关于他汀类药物抗炎作用的研究也日渐增多,其抗炎作用的发现表明,应用他汀类药物治疗动脉粥样硬化除依靠其降脂作用外还有其他的益处,但是目前它具体的抗炎机制尚不明确。在本研究中,我们用ox-LDL作用于人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和单核细胞(THP1),诱导内皮细胞和单核细胞的炎症反应,观察阿托伐他汀能否降低ox-LDL诱导的炎症反应以及阐明其影响炎症反应的机制。第一章阿托伐他汀对ox-LDL诱导的HUVEC细胞炎症反应的影响目的：观察ox-LDL诱导内皮细胞表达ICAM-1、VCAM-1和MCP-1的效应,同时用阿托伐他汀进行干预,观察阿托伐他汀能否降低ox-LDL诱导的炎症分子的表达。方法：1. HUVEC细胞的培养：复苏HUVEC细胞,使用ECM培养基体外培养,每天观察细胞的形态及增殖活性。2.MTT法检测ox-LDL对HUVEC细胞的增殖活性的影响。3.实验分组：(1)对照组,培养液培养,作为对照；(2) ox-LDL刺激组(浓度为100μg/ml),只添加ox-LDL;(3)阿托伐他汀组(1μM),只添加阿托伐他汀(4)阿托伐他汀(1μM)+ox-LDL(100μg/ml)组。4. Western-Blot检测ICAM1和VCAM1蛋白的表达变化。5. Real-Time PCR检测ICAM1、VCAMl和MCP-1的mRNA表达变化。6. ELISA检测HUVEC细胞分泌的MCP-1的变化结果：1.MTT结果表明0.5、1、2.5、5μM的ox-LDL均未对HUVEC细胞的生长增殖产生明显影响。2. Western-Blot检测发现,与对照组相比,ox-LDL可以增强ICAM1和VCAMl蛋白的表达,阿托伐他汀可以降低ox-LDL诱导的ICAM1和VCAMl蛋白的表达。3. Real-Time PCR检测发现,ox-LDL可以升高ICAM1、VCAM1和MCP-1mRNA的表达,阿托伐他汀可以降低ox-LDL诱导的ICAM1、VCAM1和MCP-1mRNA的表达。4. ELISA检测发现,ox-LDL可以增加HUVEC细胞分泌MCP-1,阿托伐他汀可以降低ox-LDL诱导MCP-1的分泌。结论：ox-LDL可以诱导脐静脉内皮细胞产生炎症反应,阿托伐他汀可以降低ox-LDL诱导的炎症反应。第二章阿托伐他汀对ox-LDL诱导的THP1细胞炎症反应的影响目的：观察ox-LDL诱导单核细胞THP1分泌TNF-α、IL-6和IL-1β的效应,同时用阿托伐他汀进行干预,观察阿托伐他汀能否降低ox-LDL诱导的炎症分子的表达。方法：1.THP1细胞的培养：复苏THP1细胞,使用RPMI-1640培养基体外培养,每天观察细胞的形态及增殖活性。2.MTT法检测ox-LDL对THP1细胞的增殖活性的影响。3.实验分组：(1)对照组,培养液培养,作为对照；(2)ox-LDL刺激组(浓度为100μg/ml),只添加ox-LDL;(3)阿托伐他汀组(1μM),只添加阿托伐他汀(4)阿托伐他汀(1μM)+ox-LDL(100μg/ml)组。4. Real-Time PCR检测TNF-α、IL-6和工L-18的mRNA表达变化。5. ELISA检测THP1细胞分泌的TNF-α、IL-6和IL-1β的变化结果：1.MTT结果表明0.5、1、2.5、5μM的ox-LDL均未对THP1细胞的生长增殖产生明显影响。2. Real-Time PCR检测发现,ox-LDL可以升高TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA的表达,阿托伐他汀可以降低ox-LDL诱导的TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA的表达。3.ELISA检测发现,ox-LDL可以增加HUVEC细胞分泌TNF-α、IL-6和IL-1β的分泌,阿托伐他汀可以降低ox-LDL诱导TNF-α、IL-6和IL-1β的分泌。结论：ox-LDL可以诱导单核细胞THP1产生炎症反应,阿托伐他汀可以降低ox-LDL诱导的炎症反应。