蓖麻茎秆花青素合成相关MYB转录因子的筛选与功能鉴定

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蓖麻属大戟科一年生或多年生双子叶草本植物,是可再生生物能源的优质材料。花青素是属于酚类化合物中的类黄酮家族的天然色素,对植株体颜色的形成、提高植物的耐逆境胁迫能力有重要作用。进行蓖麻茎色调节基因的筛选与开发高抗蓖麻新种质对于蓖麻抗逆育种有重要意义,也为其他作物抗逆育种提供新的视角。本研究采用转录组测序技术,以红茎蓖麻(3921)与绿茎蓖麻(1101)杂交后的F2代极端个体的蓖麻叶片为材料进行测序,从中筛选了2个与蓖麻花青素合成相关的R2R3-MYB转录因子基因,并对这两个基因进行了克隆、生物信息学分析、瞬时表达研究以及功能鉴定。主要研究结果如下:1. 转录组结果显示,共鉴定到差异表达基因841个,其中上调表达差异基因343个,下调表达基因498个。对这些差异表达基因进行功能注释、GO分析与KEGG富集分析发现,富集基因最多的类别是生物过程类,其次是分子功能类,最少是细胞组分类;共有96个差异基因富集到代谢通路中,其中主要富集的代谢通路为苯丙烷类生物合成和苯丙氨酸代谢通路。进一步筛选到类黄酮生物合成途径相关基因84条,有11条基因在红茎与绿茎蓖麻间差异表达,其中Rc PAL、Rc CHS、Rc ANS和Rc DFR基因在红茎蓖麻中上调表达,在绿茎蓖麻中差异表达不显著。2. 从红茎蓖麻叶片中克隆获得了2个花青素合成相关的MYB转录因子基因,分别命名为Rc MYB77、Rc MYB114,其完整的CDS序列长度分别为738bp、594bp,分别编码245和198个氨基酸,预测分子量27414.4k Da与47498.9k Da,等电点为6.4与5.2,属于R2R3-MYB转录因子,具有典型的MYB家族保守结构域以及功能结构域。3. Rc MYB77在红茎蓖麻中表达量显著高于绿茎蓖麻,Rc MYB114在绿茎蓖麻中的表达量显著高于红茎蓖麻。Rc MYB77与Rc MYB114在红茎蓖麻的各个组织中均有表达,Rc MYB77在叶片中的表达量高于在其他组织中的表达量。Rc MYB77与Rc CHS、Rc ANS和Rc DFR的表达呈正相关。Rc MYB114则与花青素含量负相关。4. 亚细胞定位结果显示Rc MYB77与Rc MYB114蛋白均在细胞膜中表达。采用农杆菌介导的遗传转化法进行Rc MYB77与Rc MYB114过表达的遗传转化试验,遗传转化结果表明过表达的Rc MYB77转基因蓖麻茎秆颜色没有呈现出明显变化,却出现叶片为红色的现象,过表达Rc MYB77与Rc MYB114的T2代拟南芥无表型变化。其他分子生物学鉴定有待进一步研究。
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