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【目的】为了探讨Kruppel样因子15在大鼠腹膜间皮细胞衰老中的作用,本研究以TGF-β1诱导的大鼠腹膜间皮细胞衰老为模型,来观察KLF15的作用和可能的作用机制,我们使用脂质体转染大鼠原代腹膜间皮细胞构建细胞过表达KLF15干预,随后检测各通路分子mRNA和蛋白的表达情况及对细胞衰老的影响。【方法】取SD雄性大鼠肠系膜、脾胃韧带,分离培养原代大鼠腹膜间皮细胞,流式细胞术进行细胞鉴定。传代培养至第三代作为实验对象。构建真核过表达质粒pcDNA3.1-KLF15,分别用脂质体转染质粒pcDNA3.1(空载质粒)和pcDNA3.1-KLF15(过表达质粒)至大鼠腹膜间皮细胞,用Western Blot、Real-Time PCR检测KLF15mRNA和蛋白的表达验证是否成功过表达KLF15。观察TGF-β1干预的不同影响。实验分组:(1)对照组(control组);(2)空载质粒转染组(pcDNA3.1组);(3)KLF15过表达组(pcDNA3.1-KLF15组);(4)TGF-β1处理对照组(control+TGF-β1组);(5)TGF-β1处理空载质粒转染组(pcDNA3.1组+TGF-β1组);(6)TGF-β1处理KLF15过表达组(pcDNA3.1-KLF15+TGF-β1组)。TGF-β1处理的浓度为2ng/m L,处理24h。Western Blot检测p-Smad2/3、p21蛋白的表达,Real-Time PCR检测Smad2、Smad3、p21 mRNA的表达。细胞衰老β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况。【结果】1.原代提取的大鼠腹膜间皮细胞经流式细胞术鉴定原代大鼠腹膜间皮细胞纯度达到90%以上,用于实验。2.大肠杆菌转化所得菌液经测序并经DNAman软件进行序列比对,合成的质粒为正确的含大鼠KLF15基因的质粒。3.质粒转染36 h后,pcDNA3.1-KLF15组与control组相比,KLF15蛋白和mRNA的表达明显升高(P<0.05),而空载质粒转染组与对照组相比,KLF15的蛋白和mRNA的表达无明显差异(P>0.05),提示原代大鼠腹膜间皮细胞成功过表达KLF15。4.pcDNA3.1-KLF15组Smad2、Smad3、p21的mRNA和p-Smad2/3、p21蛋白的表达明显低于control组(P<0.05)。TGF-β1处理后,对于Smad2、Smad3、p21的mRNA和p-Smad2/3、p21蛋白的表达,control+TGF-β1组的明显高于control组(P<0.05),pcDNA3.1-KLF15+TGF-β1组明显高于pcDNA3.1-KLF15组(P<0.05),pcDNA3.1-KLF15+TGF-β1组明显低于control+TGF-β1组(P<0.05),而control组与pcDNA3.1组、control+TGF-β1组与pcDNA3.1+TGF-β1组则无明显差异(P>0.05)。5.pcDNA3.1-KLF15组细胞衰老β-半乳糖苷酶染色阳性细胞率明显低于control组(P<0.05)。TGF-β1处理后,对于细胞衰老β-半乳糖苷酶染色阳性细胞率,control+TGF-β1组的明显高于control组(P<0.01),pcDNA3.1-KLF15+TGF-β1组明显高于pcDNA3.1-KLF15组(P<0.05),pcDNA3.1-KLF15+TGF-β1组明显低于control+TGF-β1组(P<0.05),而control组与pcDNA3.1组、control+TGF-β1组与pcDNA3.1+TGF-β1组则无明显差异(P>0.05)。【结论】在TGF-β1诱导的大鼠腹膜间皮细胞衰老模型中,TGF-β1通过调控Smad2、Smad3参与了腹膜间皮细胞衰老。KLF15能延缓大鼠腹膜间皮细胞衰老,可能是通过调控TGF-β1/Smad信号通路参与腹膜间皮细胞衰老的调控,可能可以作为临床防治腹膜衰老的药物干预靶点。