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研究目的孤独症谱系障碍(ASD)是一种神经发育异常的疾病,会出现社会互动困难、交流障碍,重复刻板行为等症状。miRNA的表达异常与疾病的易感性有关,已用于多种疾病的诊断和预后,但目前只有少数研究报道了miRNA与孤独症谱系障碍(Autism Spectrum Disorder,ASD)的相关性。本研究拟对孤独症谱系障碍儿童外周血中异常表达的miRNA中进行筛选、验证并利用生物信息学工具分析其网络调控途径,以为ASD预防、诊断提供科学依据。方法通过高通量miRNA芯片分析了三对性别年龄匹配的ASD患者和健康儿童外周血中miRNA表达谱。利用17对性别、年龄匹配的ASD患者和正常儿童样本对19个差异表达的miRNA进行q RT-PCR验证,并采用受试者工作特征曲线(ROC)分析其诊断ASD的价值。采用miRNet预测差异表达miRNA潜在下游靶标基因,并与lnc RNA-m RNA整合分析中表达下调的m RNA进行比对,得到重叠的m RNA。采用Metascape进行生物学功能及蛋白相互作用网络分析。结果1.miRNA芯片结果显示,与健康儿童相比,ASD儿童外周血中有20个差异表达的miRNA,包括8个上调表达miRNA和12个下调表达miRNA。2.q RT-PCR验证结果显示hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-27a-3p、hsa-miR-142-3p、hsa-miR-142-5p在ASD儿童外周血中表达上调,差异仍有统计学意义(P值<0.05)。ROC曲线分析得到hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-27a-3p、hsa-miR-142-3p和hsa-miR-142-5p具有较高灵敏度(分别为94.12%、100%、100%、82.35%),AUC面积均大于0.7。3.通过miRNet数据库获得1761个下游靶基因,lnc RNA-m RNA整合分析中获得768个下调的差异表达m RNA,利用VENN得到106个重叠的m RNA。4.通过GO功能富集与KEGG通路富集分析,发现上述4个差异表达的miRNA调控的靶基因在细胞蛋白分解代谢过程中大量富集,蛋白相互作用网络识别到2个蛋白密集连接的MCODE组件。RBBP6、FBXL18、RLIM、FBXW7与蛋白质多泛素化、泛素化依赖蛋白分解代谢过程有关,NFE2L2、MAPK14、CDKN1A与活性氧代谢过程有关。结论1.外周血中hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-27a-3p、hsa-miR-142-3p、hsa-miR-142-5p的表达上调可能与ASD有关。2.hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-27a-3p、hsa-miR-142-5p可能通过调控RBBP6、FBXL18、RLIM、FBXW7、NFE2L2、MAPK14、CDKN1A,参与蛋白质多泛素化、泛素依赖性蛋白分解代谢过程及活性氧代谢过程,从而影响ASD的发生。