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目的类风湿关节炎(RA)是一种以慢性、进行性、侵袭性关节炎为主要表现,以关节滑膜炎及血管翳形成为主要病理特征的全身性自身免疫性疾病。其发病机制尚未完全明确。有研究报道称钙网织蛋白(CRT)可能与RA发病机制有关。本研究首先采用多种免疫学方法分析CRT在RA患者血清、滑液以及滑膜中的表达；然后对血清CRT浓度与疾病活动度DAS28、ESR和CRP的相关性进行评估,同时检测RF, anti-CCP, anti-MCV阳性和阴性的RA患者血清中CRT的水平,分析CRT在RA患者体内的情况；并进一步通过构建TRAIL诱导的JurkatT细胞凋亡模型,研究在体外CRT在Jurkat T细胞凋亡中的作用。本研究通过体内和体外实验,探讨CRT在TRAIL诱导的RAT细胞凋亡抵抗的发生机制,旨在研究CRT在RA发病机制尤其是炎症反应中的作用,为RA的诊断与治疗提供实验基础。方法1.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测70例RA患者,30例系统性红斑狼疮(SLE),25例其他自身免疫病,20例骨性关节炎(OA),35例健康对照(HC)血清中CRT的浓度；同时检测了10例RA和16例OA患者关节液中CRT浓度。应用Western blot分析RA、OA、SLE和正常对照血清样本中CRT的含量及表达形式。2.采用免疫组织化学技术检测RA和OA患者滑膜中CRT的表达。3.评估CRT的血清浓度与疾病活动度DAS28、ESR和CRP的相关性。并进一步采用ELISA方法分别检测RF, anti-CCP, anti-MCV阳性和阴性的RA病人血清中CRT的水平。4.采用ELISA分析CRT与TRAIL体外结合能力。5.采用细胞活力检测试剂(Muse)检测Jurkat T细胞活力,并用MTT的方法分析TRAIL对Jurkat T细胞增殖的影响。6.运用流式细胞技术分析CRT抑制TRAIL诱导的早期凋亡的情况。结果1.RA血清中CRT含量(4.817±2.425)ng/ml显著高于OA(3.574±0.942ng/ml)和SLE组(4.013±1.536ng/ml),其他自身免疫病组(3.882±0.837ng/ml)和健康对照组(3.726±0.627ng/ml),(P<0.05)。RA滑液中CRT含量(3.700±0.220ng/ml)高于OA组(3.563±0.153ng/ml)但无显著差异(p=0.601)。Western blot结果显示RA、SLE、OA和HC血清样品中均有CRT条带；RA的CRT表达水平高于其他三组,且未见CRT的其它表达形式。2.免疫组织化学结果显示CRT在RA关节滑膜高表达,主要位于血管内皮细胞、滑膜成纤维细胞、巨噬细胞以及血管周围。在OA组,CRT主要表达于关节滑膜的血管周围和滑膜成纤维细胞。病理学结果提示,CRT在RA滑膜组织中明显表达,与OA相比,CRT表达的位置和量均有明显差异。3.RA患者血清中CRT的浓度与DAS28、ESR和CRP正相关(R2=0.445. P<0.0001; R2=0.567, P<0.0001; R2=0.255. P<0.0001)。RF阳性的RA患者血清CRT的浓度(5.152±0.467ng/ml)高于阴性的患者(4.157±0.603ng/ml),但是没有显著性差异(p=0.192)。anti-CCP和anti-MCV抗体阳性的患者血清CRT的浓度(5.387±0.468ng/ml和5.568±0.510ng/ml)高于阴性的患者(2.928±0.143ng/ml和3.091±0.144ng/ml),有显著性差异(p=0.003,p=0.001)。4. ELISA分析CRT与TRAIL的体外结合能力,结果显示,当TRAIL分别为1μg/ml和2μg/ml时,CRT结合的百分率由115%提到了150%,CRT与TRAIL的结合呈剂量依赖关系。5. TRAIL对Jurkat T细胞增殖具有抑制作用。Jurkat T细胞分别加入50ng/ml和100ng/ml TRAIL。12个小时后,100ng/ml TRAIL处理的Jurkat T细胞显示出对增殖的抑制作用,与对照组相比有显著差异(P<0.05)。作用24个小时50ng/ml和100ng/ml TRAIL都显示出对Jurkat T细胞增殖的抑制作用,与对照组相比有显著差异(P<0.05)。6.CRT可以通过体外结合TRAIL抑制TRAIL诱导的早期凋亡。加入100ng/ml TRAIL Jurkat T细胞的早期凋亡细胞数为31.07%。同时加入不同浓度的CRT(4、8和16ng/ml)与TRAIL共培养,早期凋亡的细胞数从29.5%,降低到24.34%,22.1%。结论1.与其他自身免疫病与健康对照组相比,RA血清CRT的含量显著增高,病理学结果显示,CRT在RA滑膜组织中高表达,与OA组相比,CRT表达的位置和量均有明显差异。结果提示CRT可能参与了RA的炎症反应和关节损害。2.RA血清CRT浓度与RA的疾病活动度显著相关。CRT有望成为辅助临床判断RA疾病活动度的另一个指标。3.CRT可通过与TRAIL结合抑制TRAIL诱导的JurkatT细胞的凋亡。结果表明CRT可能通过参与RAT细胞凋亡抵抗的机制来参与RA炎症反应。