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本课题通过将纳米材料量子点与多轮基因扩增结合,以此来达到提高多轮扩增轮数,以及扩增特异性的效果。量子点在高保真的Pfu DNA聚合酶所催化的PCR体系中下可以产生明显的热启动效果,并且在50℃温浴1h的情况下依然能产生清晰的目的条带。在本课题中首先选用3种不同来源的模板以及不同GC含量的引物进行基于量子点的多轮基因扩增,探究扩增特异性的影响因素。在以海洋污损生物藤壶M8模板的多轮扩增实验中,量子点在实验中的使用使得扩增轮数从3轮有效扩增提高到了8轮,通过对比相同扩增条件下的常规多轮基因扩增以及基于纳米金的多轮基因扩增方法的扩增效果,进一步验证了量子点对多轮基因扩增特异性的提高具有显著的效果。通过对比量子点作用下的不同模板,低浓度模板的多轮基因扩增效果,以及不同表面修饰的量子点对多轮基因扩增效果的影响,量子点均表现出了稳定且优异的增效作用,在这基础上通过将扩增产物测序结果比对,显示出了量子点所作用的多轮基因扩增具有高度的忠实性,这对能否作为实际应用具有重要的意义。 量子点在由高保真Pfu DNA聚合酶所催化的多轮基因扩增中能产生明显的热启动效果,而在普通的Taq聚合酶催化的扩增体系中却没有显著的差别,因此,量子点与Pfu DNA聚合酶之间的相互作用作为主要的机理研究对象。利用琼脂糖凝胶电泳技术初步检测发现PCR体系中的各个组分均能够与量子点产生一定的作用,但量子点与Pfu DNA聚合酶的之间的影响最大,之后采用紫外可见分光光谱法以及傅里叶红外光谱法进行深入研究分析更加证实了量子点与Pfu DNA聚合酶之间的相互作用。