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目的:
对15种广西常用中草药进行抗肿瘤作用筛选,探讨其选择性抗肿瘤作用,对微血管生成的影响与酶氨酸激酶药靶的关系。建立对裂果薯皂音有效组分的分离方法并分析有效组分的药理活性。
方法:
水提醇提十五种广西特色中草药,并对有抗肿瘤作用报道的几种中草药进行初步萃取分离,利用人肝癌仙1MC-7721细胞筛选具有体外抑瘤作用的药物。利用血清药理学法将体外抑瘤作用较强的药物制成含药血清,以MTT法观察其含药血清对S1岛在C-7721细胞的体外抑制作用。建立鸡胚绒毛尿囊膜模型,观察各提取物对微血管生成的抑制作用。通过测定各有效药物对人正常肝细胞HL-7702的体外抑制作用,初步评价药物的毒性作用。
对各有效药物进行化学成分预试,测定其主要的化学成分。对前期研究中筛选所得的裂果薯进行进一步分离,利用D101大孔吸附树脂分离裂果薯乙醇提取物的正丁醇萃取组段,测定裂果薯各分离组段对SMMC-7721细胞的抑制作用,建立快速分离裂果薯有抑瘤作用的皂昔组分的分离方法。观察分离所得裂果薯皂昔对SMMC-7721、BEL-7404、CNE-1细胞的体外抑制作用,利用血清药理学法测定其含药血清对SMMC-7721细胞的抑制作用,并用鸡胚绒毛尿囊膜模型测定其对微血管生成的抑制作用。用ELISA法测定裂果薯总皂昔对酶氨酸激酶作用,并测定其对HL-7702细胞的体外作用,初步评价其毒性
结果:
在15种广西特色中草药中,有10种对SMMC-7721细胞表现出一定的抑制作用,其中裂果薯,自木通,满天星,破骨风,青九牛与叶下珠抑瘤作用较明显,IC50分别为0.083mg/ml,0.393mg/ml,0.094mg/ml,0.165mg/ml,0.215mg/ml,0.479mg/ml,这10种广西特色中草药对BEL-7404也表现出一定的抑制作用,其IC50分别白木通0.348mg/ml,土半夏2.050mg/ml,满天星0.090mg/ml,鸡骨草1.376mg/ml,破骨风0.156mg/ml,叶下珠0.546mg/ml,石上柏1.434mg/ml,溪黄草1.928mg/ml,青九牛0.214mg/ml,裂果薯0.102mg/ml。各药物对鼻咽癌细胞的作用与肝癌细胞有较大不同,与对SMMC-7721抑制的IC50相比,自木通、破骨风对CNE-1抑瘤作用有一定提升。各药物组含药血清对SMMC-7721均有不同程度的体外抑制作用,白木通、叶下珠与满天星30％浓度含药血清(抑制率分别为:38.61％,41.54％和37.47％),25％,30％浓度青九牛含药血清组(抑制率分别为:41.19％和30.13％)与相对浓度的索拉菲尼含药血清组(25％,30％浓度血清抑制率分别为:37.10％和29.71％)相比,其体外抑瘤率更高,但未达到有统计学差异的程度。鸡胚尿囊膜实验显示,各药物提取物与空白对照组相比,索拉菲尼、破骨风组的各剂量组均可引起血管均数减少,其对二、三级血管的抑制有统计学意义(p＜0.01)并呈现一定剂量依赖性:各剂量组的土半夏、血党、青九牛对三级血管有抑制作用(p＜0.01)并呈现一定剂量依赖性;高、中剂量组的裂果薯、叶下珠引起三级级血管均数减少(p＜0.01),裂果薯、叶下珠高剂量组可引起二级血管减少(p＜0.01)。满天星组、石上柏组对各级血管抑制作用不明显。对比各药物对HL-7702细胞抑制作用,满天星对于正常细胞的杀伤作用大于肿瘤细胞,裂果薯、破骨风与青九牛在抑制三种癌细胞时毒性均较小,其中青九牛抑制肝癌细胞时毒性最低(TI＞12),但裂果薯抑瘤作用最强。叶下珠醇提物主要成分为非还原性糖、昔,黄隅,葱酿与盼类、探质。满天星醇提物、自木通醇提物主要成分为非还原性糖、营,可能含有少量黄酣。破骨风醇提物主要含有非还原性糖、昔。
青九牛水提物主要含有黄酣与惠酿,可能含有少量还原性糖。通过建立分离方法分离所得的裂果薯总皂背对SMMC-7721、BEL-7404、CNE-1细胞均有较强抑制,IC50分别0.00293mg/ml,0.00716mg/ml和0.00546mg/ml,并且对HL-7702细胞毒性较小。其含药血清对SMMC-7721细胞也有抑制作用。裂果薯皂营的各剂量组均可引起血管均数减少,其对二、三级血管的抑制有统计学意义(p＜0.01)。索拉菲尼各剂量组、裂果薯皂背中、高剂量组能够抑制酷氨酸酶含量(p＜0.01),并表现出一定剂量依赖性(高剂量组与中、低剂量组差异P＜0.01)与依赖作用(P＜0.01)。
结论:
白木通,满天星,破骨风,叶下珠,鸡骨草,土牛膝,石上柏以及溪黄草的醇提物,青九牛的水提物与索拉菲尼有体外抑瘤作用。索拉菲尼,石上柏,叶下珠,白木通,青九牛,满天星的含药血清具有体外抑瘤作用。
索拉菲尼,溪黄草,叶下珠,血党,破骨风,青九牛,土半夏能够抑制血管生长。裂果薯分离方法能够有效富集裂果薯皂昔,裂果薯皂营对肿瘤生长与微血管生长均有较强抑制,并且能够降低酶氨酸酶含量,其机理可能与抑制酷氨酸激酶有关。
对15种广西常用中草药进行抗肿瘤作用筛选,探讨其选择性抗肿瘤作用,对微血管生成的影响与酶氨酸激酶药靶的关系。建立对裂果薯皂音有效组分的分离方法并分析有效组分的药理活性。
方法:
水提醇提十五种广西特色中草药,并对有抗肿瘤作用报道的几种中草药进行初步萃取分离,利用人肝癌仙1MC-7721细胞筛选具有体外抑瘤作用的药物。利用血清药理学法将体外抑瘤作用较强的药物制成含药血清,以MTT法观察其含药血清对S1岛在C-7721细胞的体外抑制作用。建立鸡胚绒毛尿囊膜模型,观察各提取物对微血管生成的抑制作用。通过测定各有效药物对人正常肝细胞HL-7702的体外抑制作用,初步评价药物的毒性作用。
对各有效药物进行化学成分预试,测定其主要的化学成分。对前期研究中筛选所得的裂果薯进行进一步分离,利用D101大孔吸附树脂分离裂果薯乙醇提取物的正丁醇萃取组段,测定裂果薯各分离组段对SMMC-7721细胞的抑制作用,建立快速分离裂果薯有抑瘤作用的皂昔组分的分离方法。观察分离所得裂果薯皂昔对SMMC-7721、BEL-7404、CNE-1细胞的体外抑制作用,利用血清药理学法测定其含药血清对SMMC-7721细胞的抑制作用,并用鸡胚绒毛尿囊膜模型测定其对微血管生成的抑制作用。用ELISA法测定裂果薯总皂昔对酶氨酸激酶作用,并测定其对HL-7702细胞的体外作用,初步评价其毒性
结果:
在15种广西特色中草药中,有10种对SMMC-7721细胞表现出一定的抑制作用,其中裂果薯,自木通,满天星,破骨风,青九牛与叶下珠抑瘤作用较明显,IC50分别为0.083mg/ml,0.393mg/ml,0.094mg/ml,0.165mg/ml,0.215mg/ml,0.479mg/ml,这10种广西特色中草药对BEL-7404也表现出一定的抑制作用,其IC50分别白木通0.348mg/ml,土半夏2.050mg/ml,满天星0.090mg/ml,鸡骨草1.376mg/ml,破骨风0.156mg/ml,叶下珠0.546mg/ml,石上柏1.434mg/ml,溪黄草1.928mg/ml,青九牛0.214mg/ml,裂果薯0.102mg/ml。各药物对鼻咽癌细胞的作用与肝癌细胞有较大不同,与对SMMC-7721抑制的IC50相比,自木通、破骨风对CNE-1抑瘤作用有一定提升。各药物组含药血清对SMMC-7721均有不同程度的体外抑制作用,白木通、叶下珠与满天星30％浓度含药血清(抑制率分别为:38.61％,41.54％和37.47％),25％,30％浓度青九牛含药血清组(抑制率分别为:41.19％和30.13％)与相对浓度的索拉菲尼含药血清组(25％,30％浓度血清抑制率分别为:37.10％和29.71％)相比,其体外抑瘤率更高,但未达到有统计学差异的程度。鸡胚尿囊膜实验显示,各药物提取物与空白对照组相比,索拉菲尼、破骨风组的各剂量组均可引起血管均数减少,其对二、三级血管的抑制有统计学意义(p＜0.01)并呈现一定剂量依赖性:各剂量组的土半夏、血党、青九牛对三级血管有抑制作用(p＜0.01)并呈现一定剂量依赖性;高、中剂量组的裂果薯、叶下珠引起三级级血管均数减少(p＜0.01),裂果薯、叶下珠高剂量组可引起二级血管减少(p＜0.01)。满天星组、石上柏组对各级血管抑制作用不明显。对比各药物对HL-7702细胞抑制作用,满天星对于正常细胞的杀伤作用大于肿瘤细胞,裂果薯、破骨风与青九牛在抑制三种癌细胞时毒性均较小,其中青九牛抑制肝癌细胞时毒性最低(TI＞12),但裂果薯抑瘤作用最强。叶下珠醇提物主要成分为非还原性糖、昔,黄隅,葱酿与盼类、探质。满天星醇提物、自木通醇提物主要成分为非还原性糖、营,可能含有少量黄酣。破骨风醇提物主要含有非还原性糖、昔。
青九牛水提物主要含有黄酣与惠酿,可能含有少量还原性糖。通过建立分离方法分离所得的裂果薯总皂背对SMMC-7721、BEL-7404、CNE-1细胞均有较强抑制,IC50分别0.00293mg/ml,0.00716mg/ml和0.00546mg/ml,并且对HL-7702细胞毒性较小。其含药血清对SMMC-7721细胞也有抑制作用。裂果薯皂营的各剂量组均可引起血管均数减少,其对二、三级血管的抑制有统计学意义(p＜0.01)。索拉菲尼各剂量组、裂果薯皂背中、高剂量组能够抑制酷氨酸酶含量(p＜0.01),并表现出一定剂量依赖性(高剂量组与中、低剂量组差异P＜0.01)与依赖作用(P＜0.01)。
结论:
白木通,满天星,破骨风,叶下珠,鸡骨草,土牛膝,石上柏以及溪黄草的醇提物,青九牛的水提物与索拉菲尼有体外抑瘤作用。索拉菲尼,石上柏,叶下珠,白木通,青九牛,满天星的含药血清具有体外抑瘤作用。
索拉菲尼,溪黄草,叶下珠,血党,破骨风,青九牛,土半夏能够抑制血管生长。裂果薯分离方法能够有效富集裂果薯皂昔,裂果薯皂营对肿瘤生长与微血管生长均有较强抑制,并且能够降低酶氨酸酶含量,其机理可能与抑制酷氨酸激酶有关。