稻瘟病菌丝氨酸蛋白酶在水稻中的功能验证

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:denggaoangyuan
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稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)是水稻重要病害稻瘟病的病原菌,也是研究丝状真菌生物学的重要模式生物。植物与病原菌相互作用的过程中,涉及双方许多信号分子的识别与传导。在病原菌方面,这些信号分子往往就是与植物受体蛋白起作用的激发子或其它致病因子。分泌蛋白因其分泌到体外的特性,最有可能是病原菌分泌到细胞外与寄主受体蛋白起作用的激发子和致病因子。很多研究表明稻瘟病菌丝氨酸蛋白酶很可能是一种潜在的致病因子。在先前的研究中我们认为表达强度较大的稻瘟病菌丝氨酸蛋白酶基因MGG 07965.5很可能具有比较重要的生物学功能。进一步的生物信息学分析表明:它是一种分泌蛋白,含有一个具有20个氨基酸残基的信号肽序列。本研究反转录测序发现在稻瘟病菌数据库中的丝氨酸蛋白酶基因MGG 07965.5注释为内含子的部分,实际上可能是外显子部分。为了进一步了解丝氨酸蛋白酶对水稻的影响,研究构建了分别含有全长MGG 07965.5和剪切信号肽的MGG 07965.5基因的瞬时表达载体pUPTN-F-07965.5、pUPTN-C-07965.5和过量表达载体pCAMBIA1301-ubi-F-07965、pCAMBIA1301-ubi-C-07965。通过基因枪轰击将瞬时表达载体和1301载体转化水稻品种CO39和其抗稻瘟的近等基因系Pi9(C751)水稻叶片,使其共表达。结果发现在Pi9的水稻叶片中GUS表达量较CO39中的GUS表达量明显降低,但剪切信号肽与否对GUS表达量似乎没有影响。说明稻瘟病菌丝氨酸蛋白酶基因MGG07965.5很可能是稻瘟病菌的致病基因,它的表达产物可能是引起抗病水稻过敏性反应的激发子之一。本研究还将构建的过量表达载体转化到水稻品种明恢86中,进行组成型表达。分别得到含有全长MGG 07965.5的转基因水稻12株,剪切信号肽的MGG 07965.5基因的转基因水稻16株。收获经生物鉴定呈阳性的植株种子,用于下一步的研究。
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