论文部分内容阅读
谷子是我国的一种传统作物,随着种植面积的不断扩大,谷子的各种病害接踵而至。谷子有多种真菌性病害,其中,谷子粒黑穗病和谷瘟病在我国的主要产区均有不同程度的发生,严重影响谷子的产量和品质。我们通过对谷种拌菌后田间试验,检测了病菌对土壤酶活性及根际土壤微生物多样性的影响,根据谷子粒黑穗病菌的ITS序列,设计特异性引物,建立了针对粒黑穗病菌的PCR检测技术;同时从谷田根际和非根际土壤中分离微生物菌株,对谷瘟病菌进行拮抗试验,筛选到多株具有拮抗作用的细菌和放线菌菌株,并对筛选出的拮抗菌进行分类地位分析。具体研究结果如下: 1、选黑穗病抗性不同的3个谷子品种(冀谷20,晋谷21,长农35),研究致病菌黑粉菌对谷田土壤酶活性的影响,分析土壤酶活与植株抗病性的关系。研究发现,谷种拌病菌孢子播种后,3个谷子品种表现不同,冀谷20发病率0.3%,晋谷21发病率10.2%,长农35病穗发生率65.0%;在植株发育的拔节期和抽穗期检测根周土壤酶活性,拌菌组土样中过氧化氢酶(CAT)、多酚氧化酶(PPO)、蔗糖酶、碱性磷酸酶和脲酶活性增高,纤维素酶活性降低。说明病菌能诱导谷田CAT、PPO、蔗糖酶、碱性磷酸酶和脲酶活性增高,且CAT、PPO、蔗糖酶和碱性磷酸酶活性水平在不同品种间存在差异,不同品种对土壤酶活性有较大影响,但脲酶活性差异出现在不同发育期之间,并无品种间差异。谷子不同品种根际微生物多样性也不同。结果表明,黑粉菌进入土壤中可影响谷田酶活性及细菌种群特征,改变土壤微生态,土壤微生物参与谷子植株对黑穗病的抗病防御生理过程。 2、为建立一种快速、有效的鉴定谷子粒黑穗病菌的分子检测方法,本文用真菌通用引物ITS1/ITS4对谷子粒黑穗病菌ITS序列进行扩增,根据扩增产物序列,设计了一对引物F1/R1用于Ustilago crameri的分子检测,并检测了引物的特异性和灵敏度。利用该对特异性引物对谷子粒黑穗病菌DNA、谷子白发病菌DNA、谷瘟病菌DNA及谷子叶片基因组DNA进行PCR扩增,结果仅谷子粒黑穗病菌DNA作为模板时能扩增出1条特异性条带,其他材料均未出现扩增条带,对谷子粒黑穗病菌基因组DNA检测的灵敏度为10 ng/μL。对谷种拌菌组植株的检测结果表明,该对引物可以特异性检测出穗梗及旗叶中谷子粒黑穗病菌的存在,不同品种间检出率与田间发病率数据基本一致,说明所用引物在鉴定植株抗病性方面具有较高的特异性。 3、采用土壤稀释法从谷子植株根际与非根际土样中进行微生物菌株的分离培养,分离到细菌90株,放线菌93株,真菌87株;将分离到的菌株通过平板对峙方法对谷瘟病菌进行拮抗试验,筛选到对谷瘟病菌有拮抗作用的细菌29株,放线菌36株,真菌21株。经过复筛及定量筛选,获得抑菌能力较强的细菌4株,放线菌3株。对抑菌能力较强的4株细菌进行平板隔离挥发性试验,结果表明,4株细菌菌株不是通过释放挥发性物质抑制谷瘟病菌生长。之后对抑菌能力较强的4株细菌进行了生物学鉴定,结合培养特征,生理生化特性及分子生物学方法,初步鉴定菌株B55为Bacillus pumilus,菌株B56为Bacillus safensis,菌株B18和菌株B61为芽孢杆菌属Bacillus sp.。结果显示,从谷田筛选的菌株对谷瘟病菌的控制具有潜在的应用价值。