21世纪传染痫仍是威胁着人类生命健康的大敌，尤其是在发展中国家传染病发病率居高不下。2003年SARS的爆发，2005年猪链球菌和禽流感感染事件，提醒我们必须密切关注传染病的动向。随着生活环境变化和致病微生物自身变异，新的传染病原不时出现。当前全世界新出现的传染病有40多种，其中有一半已在我国流行；预计今后20年还将发生30种新传染病。而结核病、性病等老传染病发病率都呈现出上升趋势，性传播疾病将大幅度上升，性病患者人数每年以15％的速度增加。我国是全世界艾滋病病毒(HIV)感染人数上升速度最快的国家之一。 感染性疾病发病首先是由于病原微生物吸附宿主表皮或粘膜，然后进一步侵袭进入体内进行繁殖而引发疾病。如用消毒剂在致病微生物与皮肤或粘膜接触初期直接予以杀灭，可达到有效预防的目的。但现有消毒剂多是氯元素、氧元素、醛类等有机化学合成品，具有较强刺激性，气味大，易造成环境污染，不能直接由于人体皮肤、粘膜等缺点。本研究的目的在于研制一种能够高效、广谱、速效杀灭多种病原体，安全无毒、无刺激、无环境污染，可直接在人体皮肤、粘膜使用的新型消毒乳剂。 纳米乳剂是近年来发展的一种新类型乳剂，乳剂中分散悬液颗粒度直径在lO-lO-lO-7m范围内。有文献报道，使用有机原料制备的新型乳剂表现出强、速效杀灭多种病原微生物的活性，并且毒性低，可用于多种途径的消毒灭菌。但配方中的原料大多有一定的化学毒性和腐蚀性。 因此本研究选择具有天然、广谱抗微生物活性的蜂胶醇溶液为油相，硝酸银水溶液为水相，表面活性剂吐温-80为乳化剂，按照纳米乳剂形成的新理论，以适当的比例混合后，室温下温和搅拌制备成水包油型(0/W)蜂胶一银离子复合纳米乳剂。并对复合乳剂的理化性质和抗菌活性物质总黄酮的含量进行测定，透射电镜观察乳剂的纳米结构体系；比较复合乳剂与单独使用相同浓度蜂胶和银离子的抑菌效果；检测复合乳剂的杀灭细菌、真菌、病毒和芽孢的效果和稳定性；研究复合乳剂杀灭革兰氏阴性和阳性菌的杀菌机理；评价复合乳剂的毒性和安全性。 结果表明： 1.理化性质和结构制备的复合蜂胶-银离子乳剂外观为棕黄色透明液体，pH值6.5，其中蜂胶含量为20g/L，银离子浓度为50ug/L，总黄酮含量为11g／L。4500rpm离心后，样液无分层或混浊。透射电镜观察乳剂颗粒直径为30-100nm。 2.杀灭微生物活性悬液杀菌定量试验结果显示：复合纳米乳剂的最低杀菌浓度为体积分数6．25％(即蜂胶含量为1．25g/L，Ag+浓度为3．125ug/L)对大肠杆菌，金黄色葡萄球菌作用lmin，绿脓杆菌作用3min，平均杀灭率为100％，杀灭对数值(KL)均大于5.00。对白色念珠菌的最低杀菌浓度为原液体积分数的12.5％(即蜂胶含量为2．50g几，Ag*浓度为6．25ug／L)作用5min，平均杀灭率即可达到100％，杀灭对数值(KL))5.00。对炭疽杆菌的最低杀灭浓度为体积分数50％(即蜂胶含量为l0g/1，Ag+浓度为25ug／1)，作用40min可100％杀灭，甩)5.00。复合纳米乳剂原液对炭疽芽孢4h灭活率可达80％，但随时间延长至6h，灭活率未见继续增长，表明对炭疽芽孢具有部分杀灭作用。对脊髓灰质病毒具有明显的灭活作用，体积分数80％原液作用1、2、3min均可完全杀灭试验滴度的脊髓灰质病毒，各时间组的平均灭活对数>5．00。 3.稳定性复合纳米乳剂原液置于37℃温箱90d后，其有效成分总黄酮含量下降0．53％，小于规范10％的要求，其对大肠杆菌的杀灭效果与放置前比较均在12．5％百分体积5min内100％杀灭，无明显变化。表明复合乳剂的有效期)2Y． 4.毒理试验复合纳米乳剂对小鼠急性经口毒性试验的L~o>5000mg／kg(体重)，属于实际无毒级；对大耳白兔皮肤刺激指数为0，属无刺激性；对小鼠皮下注射后注射部位未见出现红肿、溃疡等炎症反应，与正常对照的病理切片无显著差异，属无注射刺激性；对家兔急性眼刺激试验结果表明对结膜、虹膜和角膜无刺激作用，刺激积分指数最高为0，属无刺激性；对大耳白兔阴道粘膜刺激积分为0，受试阴道组织各端的切片与正常对照无差异，属无刺激作用。微核试验结果表明，对小鼠骨髓嗜多染红细胞无致微核作用，即无染色体畸变作用；对小鼠蓄积毒性试验，蓄积系数K>5，属于弱蓄积毒性。 5.杀菌机理复合纳米乳剂与大肠杆菌、金黄色葡萄球菌作用10min、15min和30min后，中和剂终止反应，染色切片，透射电镜下观察菌体结构变化。结果显示：复合纳米乳剂与大肠杆菌作用10min后，菌体产生融合，胞内含物开始溶解；作用15min时完全融合，胞内含物完全溶解；30min时融合的菌体出现裂解。而与金黄色葡萄球菌作用lOmin后，菌体内产生溶解，核质破裂：15min时胞内含物进一步溶解，胞壁出现部分裂解；30min时胞内完全溶解，胞壁损坏。表明复合纳米乳剂通过菌体融合的方式杀灭革兰氏阴性菌，而通过胞内物质溶解，同时裂解胞壁的方式产生杀灭革兰氏阳性菌。 综上所述，本研究以蜂胶和硝酸银作为抗菌的活性成分制备了颗粒直径30一100nm的复合纳米乳剂，实验室杀灭微生物和动物毒理实验结果显示该乳剂是一种能快速、强效、广谱杀灭多种微生物，安全无毒，刺激性小，稳定性好，可直接用于皮肤、粘膜消毒的新型消毒剂。