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唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素(Siglecs, Sialic acid-binding immunoglobulin-type lectins)是一类最早发现于造血细胞中的Ⅰ型跨膜蛋白家族成员,目前在人类细胞中发现约15种Siglec。由于大部分Siglecs的胞质区含有免疫受体基于酪氨酸的抑制性基序ITIM (immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif)或ITIM样结构域,使得Siglecs在免疫系统中发挥着免疫抑制功能。Siglec-5是Siglecs受体家族的一员,主要表达于人类巨噬细胞、单核细胞、树突状细胞及中性粒细胞的细胞膜上。由于这些细胞是构成天然免疫的重要成员,因此Siglec-5作为免疫抑制性受体,其表达参与了天然免疫系统的功能调节及免疫相关疾病的发生发展。天然免疫又被称作非特异性免疫,由组织屏障、天然免疫细胞和免疫活性物质等构成,形成了机体对抗病原体入侵的前两道防线,天然免疫机能主要依赖于天然免疫细胞表面的多种模式识别受体(PRRs),它们可分别识别一种或几种存在于病原微生物表面的病原相关分子模式(PAMPs),发挥多种免疫功能,如介导吞噬细胞吞噬、参与T细胞活化和增殖等。近年来发现并不是所有的PRRs下游信号通路都具有活化天然免疫细胞的作用,Siglecs家族就是一类抑制天然免疫的PRRs。维甲酸类药物通过与其受体的结合发挥着广泛的临床效果,特别是全反式维甲酸(ATF RA)在急性早幼粒白血病(APL, acute promyelocytic leukemia)的治疗上具有显著的效果。由于在抑制肿瘤细胞的增殖、迁移及促进肿瘤细胞的凋亡及分化的作用明显,ATRA近年来被用于多种肿瘤疾病的探索治疗中。我们发现在Siglec-5启动子上含有多个与维甲酸X受体(RXR)结合的序列AGGTC A,因此,本论文研究维甲酸受体激动剂及拮抗剂对Siglec-5表达的影响以及对天然免疫的调节作用。研究方法：(1).构建了包含Siglec-5启动子的荧光素酶报告基因载体,采用荧光素酶报告基因检测法研究ATRA及其衍生物对Siglec-5启动子活性的影响。(2).采用不同浓度的ATRA处理U937细胞,用Western Blot法研究ATRA对Siglec-5的表达影响以及剂量依赖关系。(3).采用流式细胞法研究经ATRA.9-cisRA及Hx531等药物处理U937细胞48小时后Siglec-5表达含量的变化。(4).ATRA.9-cisRA处理U937细胞48小时后,收集细胞并用细菌GBS感染20分钟,最后裂解细胞进行免疫共沉淀,研究ATRA及9-cisRA对Siglec-5胞内ITIM结构域招募SHP—1及SHP-2的影响。(5).以者正常人外周血全血及分离的中性粒细胞为材料,在细菌因子fMLP刺激作用下,采用呼吸爆发实验研究Siglec-5及ATRA对全血及中性粒细胞吞噬作用的影响。(6).使用PMA诱导U927细胞分化为贴壁的巨噬细胞,加不同药物及LPS处理,酶联免疫法检测细胞因子IL—6和TNF-α释放,研究ATRA及其衍生物对吞噬细胞功能的影响。研究结果：(1).分别采用荧光素酶报告基因检测法、Western Blot法以及流式细胞术研究维甲酸及其衍生物对Siglec-5表达影响,结果显示ATRA,9-cisRA及拮抗剂Hx531都抑制了Siglec-5启动子活性,且ATRAX对Siglec-5的表达抑制呈现剂量依赖性。(2).免疫共沉淀法结果显示ATRA在信号转导机制上通过减弱Siglec-5胞内ITIM结构域与SHP—1及SHP-2的偶联作用,进而增加U937细胞的呼吸爆发能力。(3).呼吸爆发实验证实了ATRA能够通过抑带Siglec-5表达增强中性粒细胞的吞噬能力。(4).酶联免疫法结果显示ATRA及其衍生物9-cisRA、Hx531减弱了巨噬细胞释放IL-6的含量,而TNF-α含量变化无统计学意义。结论：S iglec-5启动子上含有维甲酸受体反应元件,过表达RXR受体能够增强Siglec-5的表达。进一步的研究发现,维甲酸受体的激动剂ATRA,9-cisRA在Siglec-5基因表达中发挥着反式激动效应,均能使Siglec-5的表达低于基础水平。本研究结果证明ATRA能够抑制中性白细胞Sigle c-5的表达,进而增强了天然免疫系统对含唾液酸及β蛋白类病原菌的免疫监控作用,提高了机体的天然免疫能力。