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目的:探究溶瘤性Ⅱ型单纯疱疹病毒在肿瘤的临床诊断以及治疗方面的应用方法:本研究通过病毒刺激PBMC增殖实验、MTT法检测体外经病毒激活的鼠外周血单核细胞(m PBMC)对CT26的杀伤效果实验,动物实验以及临床治疗的部分临床试验数据初步HSV2-h GM-CSF在肿瘤的临床治疗中的应用效果。通过抽取正常人外周血4ml,将宫颈癌细胞系按一定梯度加到外周血中,按照MOI=1比例转染重组病毒OHSV2-GFP+,然后用流式细胞仪进行该方法检出率测定,收集临床标本外周血4ml,裂解去除红细胞后,按照MOI=1的比例转染重组病毒OHSV2-GFP+,24h后收集细胞,流式细胞仪检测CD45+/GFP-细胞并计数,初步检测该方法临床应用的可行性。结果:1,在病毒刺激PBMC增殖实验中,实验结果表明不同感染复数(MOI)的紫外灭活病毒(实验组)及不同MOI的活病毒(阳性对照组),在体外均能有效的促进h PBMC的增殖。2,在MTT法检测体外经病毒激活的鼠外周血单核细胞(m PBMC)对CT26的杀伤效果实验中结果显示两种靶效比对肿瘤细胞的相对杀伤率分别为42.80%和94.84%。3,病毒激活的m PBMC治疗鼠结肠癌CT26的效果评估实验中UV-HSV2激活的m PBMC组左右两次侧抑瘤效果均比较显著,且非治疗侧(左)效果优于UV-HSV1激活的m PBMC组;UV-HSV1激活的m PBMC组只有治疗侧肿瘤体积明显降低。4,在已得到的部分临床试验数据结果显示在23例受试者中有13例(56.5%)受试者在经过VAK治疗后其体内胸腹水症状的到缓解,另外10例受试者中的6例(26.1%)其体内胸腹水症状的到稳定,只有4例(17.4%)受试者被研究者平评估为完全无效。5,在CTCs检测实验中,检测到的GFP+/CD45-细胞即为循环肿瘤细胞。检出结果显示:将Hela细胞按10,100,500(个)加入外周血中后,检测结果显示,外周血中加入Hela细胞个数10,100,500的检出数分别为6.33,61.7,300.5,总体检出率为61.7%,线性回归分析显示应用此方法捕获的CTC数量与预先加的肿瘤细胞数呈线性关系,R2≥0.95。用此方法检测40例正常人、15例宫颈炎患者和20例宫颈癌患者的GFP+/CD45-细胞数(10.90±2.3)明显高于正常人(0.38±0.12)和宫颈炎患者(0.33±0.09),P=0.003。结论:带有GM-CSF的重组Ⅱ型单纯疱疹病毒对肿瘤有着一定的杀伤作用,在治疗恶性胸腹水中能够取得不错的疗效;带有绿色荧光蛋白(GFP)的重组Ⅱ型单纯疱疹病毒能够较为精确地捕获循环肿瘤细胞,这种用HSV2-GFP检测循环肿瘤细胞的方法方便快捷、灵敏精确。