钛表面层层自组装肝素-Ⅳ胶原涂层及其抗凝与促内皮化研究

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血管支架植入体内后血栓的形成和再狭窄的发生严重影响着其功能的发挥,这一问题亟待解决。本论文在具有优异生物相容性的钛基材料表面引入具有较好抗凝作用的肝素和促进内皮细胞粘附生长的Ⅳ型胶原,通过两种生物分子的共同作用,拟实现Ti表面血液相容性与内皮细胞相容性的全面提高。首先钛经研磨、抛光、清洗和碱活化处理后,表面带上负电荷的羟基,与多聚赖氨酸的部分氨基结合,使材料形成带正电荷的氨基表面,接着将带有异种电荷的肝素和Ⅳ型胶原交替引入到材料表面。通过控制自组装层数,使材料的抗凝血与促内皮功能达到平衡。通过傅立叶红外掠射、扫描电子显微镜、原子力显微镜和水接触角测定对材料进行定性表征,通过甲苯胺蓝肝素定量、千万分之一天平、石英晶体微天平台阶仪对生物分子进行定量表征。傅立叶红外掠射检测和甲苯胺蓝肝素定量表明肝素和Ⅳ型胶原已成功组装到钛表面;与Ti相比,SEM和AFM结果显示组装后样品表面粗糙度增大,水接触角测试结果表明自组装材料表面的亲水性增加;QCM、膜的质量及厚度测试显示,随着组装层数的增加,组装到材料表面的肝素和Ⅳ胶原的增加量逐渐减少,且其膜厚的增加量也逐渐减小。体外血液相容性评价结果表明,与Ti相比,当组装层数达到11层及以上层数后,能够减少血小板在材料表面的粘附数量、适当降低粘附血小板的激活、延长APTT和TT值,表现出了一定的抗凝血性能,但其抗凝血效果并未显著提高。内皮祖细胞体外静态培养结果表明,组装肝素和Ⅳ型胶原双分子层后,内皮祖细胞在材料表面表现出较好的生物学形态,较好地促进了内皮祖细胞在材料表面的生长、增殖,有效提高了材料表面的细胞相容性;内皮祖细胞体外动态培养结果表明,在具有良好细胞相容性的肝素和Ⅳ型胶原涂层表面引入SDF-1a,有利于动态条下内皮祖细胞在样品表面的粘附。综上,本文所构建的肝素和Ⅳ型胶原多层自组装层不仅具有一定的抗凝血性能,同时能够较好促进内皮祖细胞在其表面的粘附、生长与增殖,为心血管材料抗凝血和促内皮双功能的实现提供了重要的参考。
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