毛细管电泳安培检测技术在糖和醇分析中的应用研究

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毛细管电泳(Capillary Electrophoresis, CE)是一项迅速发展的液相分离技术,也是一种多变的、强有力的分析工具。多变性在于CE具有多种分离模式可供选择,这就为满足复杂分析提供了可能;强有力在于CE具有高效,快速,自动分离,进样量小,溶剂消耗量低等多种优势。近两年来,CE方法主要研究的对象包括:抗生索、氨基酸、酚类化合物、黄酮类化合物、天然抗氧化剂、蛋白质、色素、核苷和核苷酸、农药等等,涉及食品化学、医药化学、临床检测、分子生物学等诸多领域,有着广阔的应用前景。第一章绪论回顾了CE技术的发展历史,对其原理、分离模式、检测方式、应用范围、仪器构造及技术特点进行了详细的介绍。本论文采用CE-AD方法着重探讨了血清中的兴奋性氨基酸的测定,芦笋多糖中的单糖组成的分析,以及正常人和糖尿病人尿液中多元醇的同时检测,为食品和临床检验提供了一种可选择的新方法。第二章介绍讨论了运用高效毛细管区带电泳-安培检测(CZE-AD)方法来分离测定血清样品中的六种兴奋性氨基酸。实验采用在CZE-AD中运用不同的缓冲溶液于分离、检测部分。具体如下,实验以柱端射壁检测方式作为CZE-AD接口,分离毛细管中由50mmol·L-1硼砂作为运行缓冲液,以达到通过配位作用使六种兴奋性氨基酸基线分离的目的;检测池中选择100mmol·L-1NaOH溶液,使得Cu工作电极(直径-300μm)在强碱性环境中能够对分析物产生强烈的电催化氧化电流,从而达到6种氨基酸检测灵敏度10-6或10-7mol·L-1的目的。实验对工作电极检测电位、缓冲溶液种类、浓度及PH值、分离电压和进样时间等实验参数进行了优化。在最优实验条件下,即检测电位+0.75V(vs. SCE)、分离电压15kV、电动进样时间10s(15kV)、运行缓冲溶液50mM硼砂(pH=9.3)、检测池50mMNaOH(pH=12.5),6种分析物在30分钟内可以达到较好的基线分离。最后,使用此方法对人血清样品中的兴奋性氨基酸进行了检测,结果满意。目前,已经有很多分析方法用于多糖的组分分析、结构分析,而不同的测定方法对于芦笋多糖中单糖组成分析结果不尽相同。第三章介绍讨论了使用CZE-AD方法,在“柱端射壁”的检测模式下,进行芦笋多糖的组成分析。并对Cu工作电极直径大小、缓冲种类及浓度、分离电压、进样时间等实验条件对分离检测的影响进行详细的研究。在优化条件下,7种单糖于0.12mol/L NaOH中达到基线分离,且灵敏度高、重现性好。实验结果显示,芦笋多糖由岩藻糖、半乳糖、葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、果糖、木糖7种单糖组成,其摩尔比为0.2:16.2:5.0:1.0:15.5:0.6:18.8(其中岩藻糖与果糖依据S/N=2)。相比于其他分析方法,采用CZE-AD方法更加快速、精确且进样量较低。多元醇几乎存在于所有的活体生物中,但对其新陈代谢的研究并不是太深入,近些年来多元醇在人体疾病中潜在的重要性才开始被重视并研究。鉴于某些多元醇是生物体的组成和代谢产物,并且直接和间接参与生命活动过程,它们的分离檢测在临床应用领域中同样具有重要意义。在第四章中,采用毛细管电泳-安培检测法,分离测定了人体体液中最重要的7种多元醇(赤藓糖醇、木糖醇、山梨糖醇、阿拉伯糖醇、阿东醇、甘露糖醇、半乳糖醇)。同时研究了检测电极电位,运行缓冲液的浓度、pH值,检测池溶液浓度,分离电压,电动进样时间对实验结果的影响。所得最佳实验条件为:检测电位为+0.75V(vs.SCE);运行缓冲0.07mol/L、pH=9.2的硼砂缓冲溶液;检测池0.07mol/L NaOH;分离电压17kv,电动进样时间8s(17kV)。在最优化的实验条件下,将该方法应用于正常人及糖尿病人尿样中多元醇的测定,结果良好。加标回收率为89.6-108.2%,RSD在1.5-9.1%的范围内。
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