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第一部分水蛭治疗肝内胆汁淤积性肝病的临床观察目的:探讨水蛭对于肝内胆汁淤积性肝病患者血清中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、γ-谷氨酰转肽酶(gamma-glutamyl transferase,GGT)和总胆红素(total bilirubin,TBil)水平以及对于患者临床症状的的影响。方法:选取40名肝内胆汁淤积性肝病患者,将他们随机分为2组:治疗组、对照组,每组各20名患者,予以对照组20名患者胆汁淤积性肝病常规治疗,治疗组20名患者在常规治疗基础上加用水蛭颗粒剂(3g/天),治疗时间维持2周。2周后检测患者血清中ALP、GGT和TBil水平,且对比其治疗前后临床症状。结果:经过2周的治疗后,两组患者血清中ALP、GGT和TBil水平均较治疗前明显降低,乏力及瘙痒症状较治疗前改善(P<0.05);治疗组患者ALP、GGT和TBil水平较对照组水平降低(P<0.05),治疗组患者生化指标、瘙痒及乏力症状改善优于对照组。结论:水蛭可明显降低肝内胆汁淤积性肝病患者血清中ALP、GGT及TBil水平,且有效改善患者瘙痒及乏力症状。为虫类通络药物治疗肝内胆汁淤积性肝病提供了临床依据。第二部分水蛭提取物-水蛭素对肝内胆汁淤积体内外模型的影响目的:建立肝内胆汁淤积体内外模型,研究水蛭提取物-水蛭素对胆汁淤积体内外模型的影响。方法:1.体内实验:将五十只雄性大鼠(种属:Sprague-Dawley)随机分为6组:正常组,模型组,熊去氧胆酸(UDCA)组(60 mg/kg),水蛭素高剂量组(84 u/kg),水蛭素中剂量组(63 u/kg)。水蛭素低剂量组(42 u/kg)。UDCA组以浓度为5m L/kg的胃内给药7天,每天一次;水蛭素治疗组每天皮下注射不同浓度水蛭素7天。除正常组外,其余各组于给药第5天给予100 mg/kg ANIT灌胃,每天一次,持续3天。2.体外实验:使用(Z)-Guggulsterone刺激人L02细胞(0.05μmol/ml)12小时后,给与不同浓度的水蛭素(2、4和8 u/ml)24小时后收集细胞。麻醉后取各组大鼠肝脏组织进行HE染色,并观察大鼠肝脏的病理学改变;免疫组化(IHC)分析FXR的表达;使用RT-PCR法检测各组大鼠肝脏组织及各组细胞中FXR、SHP、UGT2B4及BSEP mRNA表达情况;使用Western blot检测各组大鼠肝脏组织及各组细胞中FXR、SHP、UGT2B4和BSEP蛋白的表达情况。结果:与正常组相比,模型组肝脏组织损伤严重,FXR,SHP,UGT2B4,BSEP蛋白及mRNA表达均降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,水蛭素治疗组能在不同程度上降低血清ALT,AST,TBIL,TBA水平(P<0.05,P<0.01),改善肝脏组织损伤,促进FXR,SHP,BSEP和UGT2B4蛋白及mRNA的表达(P<0.05,P<0.01)。结论:水蛭素可以缓解ANIT诱导的肝内胆汁淤积,减轻肝脏组织损伤,其机制为通过对FXR基因表达上调,促进SHP、UGT2B4、BSEP基因表达上调,抑制胆汁淤积通路来保护肝细胞,为临床应用活血通络法治疗肝内胆汁淤积提供方向和药物筛选。