【摘 要】
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目的明确KOA滑膜组织中NGF/TrKA信号通路与外周痛敏的关系;基于NGF/TrKA信号通路探索“温经活血”外治法（“易层”贴敷为代表）改善KOA外周痛敏的疗效机制。方法（1）运用HE染色、免疫荧光、Western Blot、PCR、ELISA等方法观察临床KOA滑膜样本中NGF/TrKA信号通路是否被激活;（2）通过ELISA、外周痛敏阈值检测等方法观察“易层”贴敷对血清疼痛介质及外周痛敏的干
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目的明确KOA滑膜组织中NGF/TrKA信号通路与外周痛敏的关系;基于NGF/TrKA信号通路探索“温经活血”外治法（“易层”贴敷为代表）改善KOA外周痛敏的疗效机制。方法（1）运用HE染色、免疫荧光、Western Blot、PCR、ELISA等方法观察临床KOA滑膜样本中NGF/TrKA信号通路是否被激活;（2）通过ELISA、外周痛敏阈值检测等方法观察“易层”贴敷对血清疼痛介质及外周痛敏的干预效应;（3）通过LPS体外构建成纤维样滑膜细胞（FLS）炎症模型,运用Western Blot、PCR等方法,探讨NGF/TrKA信号通路对FLS中疼痛介质和炎症因子表达的作用;（4）通过ACLT法构建大鼠KOA模型,运用HE染色、免疫组化、免疫荧光、Western Blot、PCR、外周痛敏阈值检测等实验方法,明确NGF/TrKA信号通路参与外周痛敏的机制;（5）ACLT法构建大鼠KOA模型,运用HE染色、Western Blot、PCR、外周痛敏阈值检测等实验方法,探索“易层”贴敷改善KOA外周痛敏的疗效机制。结果（1）TKA 组患者滑膜组织中 NGF、TrKA、TRPV1、.IL-1β、CGRP、PGP 9.5 等蛋白和基因表达均高于关节镜组,差异有统计学意义;（2）KOA患者使用“易层”贴敷后血清中IL-6、TNF-α含量较使用前下降,差异有统计学意义,NGF、SP含量较使用前下降,但差异无统计学意义;“易层”贴敷治疗后患者VAS评分、膝关节外周痛敏阈值较使用前改善,差异有统计学意义;（3）在LPS组FLS炎症模型中,NGF、TrKA、TRPV1、IL-1β的蛋白和基因表达高于正常组,差异有统计学意义;使用siRNATrKA抑制TrKA表达后,NGF、TrKA、TRPV1、IL-1β的蛋白和基因表达低于LPS组,差异有统计学意义;（4）KOA模型大鼠滑膜组织中NGF、TRPV1、IL-1β、PGP9.5的蛋白和基因表达较正常组升高,差异有统计学意义;DRG组织中TRPV1、PGP9.5的蛋白和基因表达较正常组升高,差异有统计学意义;KOA组大鼠外周痛敏阈值较正常组下降;在KOA模型大鼠膝关节内注射siRNA TrKA后,上述滑膜组织、DRG组织中相关蛋白和基因表达较KOA组下降,外周痛敏状态改善;（5）“易层”贴敷可下调KOA大鼠滑膜组织中NGF、TrKA、TRPV1、IL-1β、PGP 9.5的蛋白和基因表达,差异有统计学意义;并下调DRG组织中TRPV1和神经标记物S100等蛋白和基因的表达,差异有统计学意义;还可减少大鼠滑膜组织中神经纤维密度,改善大鼠外周痛敏状态。结论（1）KOA滑膜中NGF/TrKA信号通路激活后,可促进疼痛介质、炎症因子的释放,加重局部疼痛和炎症;（2）NGF/TrKA信号通路激活后,可上调滑膜及DRG组织中TRPV1的表达,可能增加滑膜神经纤维密度,加重外周痛敏状态;抑制该通路后,可下调滑膜及DRG组织中TRPV1的表达,可能减少滑膜感觉神经纤维密度,改善外周痛敏状态;（3）“易层”贴敷可能通过抑制KOA模型大鼠滑膜组织中NGF/TrKA信号通路,下调滑膜和DRG组织中疼痛介质、炎症因子和神经标记物的表达,并可能减少滑膜组织中神经纤维密度,改善外周痛敏状态。
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