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稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)引起的稻瘟病是水稻上的重要病害。了解M.oryzae的致病分子机理不仅对防治稻瘟病具有重要的意义,而且它作为一个理想的研究体系对了解其他植物病原真菌与寄主的相互作用也有重要的意义。分离和鉴定稻瘟病菌的致病相关基因,是达到这一目标的关键所在。DNA插入突变是标记、分离功能基因的有效途径之一,ATMT是丝状真菌遗传转化的一个的新的技术,具有转化效率高、成本低,操作方便和重复性好多重优点。
利用农杆菌介导转化法(ATMT)筛选出1024个转化子,用大麦叶片离体接种的方法快速测定部分稻瘟病菌转化子的致病性。KD-560在CM培养基上菌落生长速率较慢,菌落颜色较野生型浅,菌丝致密,产孢量明显下降。在无伤口接种情况下,该突变体不能侵入大麦及水稻叶片,说明KD-560突变体在寄主组织中扩展进程被阻断。采用hiTAIL-PCR的方法扩增了T-DNA右边界的760bp基因组DNA序列,并克隆到pGEM-Teasy载体上。测序和BLAST分析结果显示,T-DNA标记基因编号为MGG08865。参考邓等研究CYP450s基因家族在四种丝状子囊菌中的进化史中将MGG08865命名为MgCYP537A3,我们将其命名为MoCYP537A3,本论文对其表型进行了初步分析。