BMSCs经肾动脉移植修复小鼠输尿管损伤的方法学研究

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输尿管梗阻是泌尿外科常见病,对于输尿管梗阻导致的肾损伤而言,首要的是解除输尿管梗阻,其中最为关键的是解除梗阻后的输尿管能否再通,即损伤的输尿管能否达到良好的修复。间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)是目前广泛关注的一种成体干细胞,现已应用于多种疾病的治疗研究中,MSCs组织来源多样,其中最常见的为骨髓来源,即骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)。目的:从方法学上研究BMSCs对输尿管损伤的修复作用。方法:首先利用显微血管夹建立BALB/c小鼠的左侧输尿管梗阻模型,并于10天后取出显微血管夹解除左侧输尿管梗阻,然后将这些实验小鼠随机分为实验组及对照组;实验组小鼠取出显微血管夹后立即经肾动脉移植绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)与荧光素酶(luciferase, Luc)双报告基因转染的BALB/c小鼠BMSCs;对照组小鼠取出显微血管夹后随即关闭切口,不移植BMSCs。接着使用小动物活体成像系统(in vivo imaging system, IVIS)示踪移植的BMSCs,使用磁共振成像(Magnetic resonance imaging, MRI)T2系列对实验小鼠进行扫描。最后采用Philips DICOM Viewer R3.0影像工作站对所有MRI原始数据进行处理并测量不同时间点的实验小鼠的左肾盂容积,通过比较实验组与对照组小鼠左侧输尿管梗阻解除后的左输尿管复通率,评估BMSCs对输尿管损伤的修复作用。结果:1. BMSCs数量与Luc信号的强度成线性相关,而没有Luc标记的BMSCs和PBS无光学信号。2.实验小鼠左侧输尿管梗阻后的左肾盂容积明显大于梗阻前(P<0.01),实验组与对照组小鼠左侧输尿管梗阻后10天的左肾盂容积无统计意义(P=0.693),各个阶段的试验小鼠的左侧输尿管梗阻后10天的左肾盂容积亦无统计意义(P=0.583);使用显微血管夹可制备均衡、稳定的小鼠左侧输尿管梗阻模型,成功率为100%。3.使用30G胰岛素注射器注射BMSCs结合医用生物蛋白胶止血可实施可靠的经小鼠肾动脉移植BMSCs操作,成功率为80%。4.移植BMSCs后不同时间点,IVIS对活体状态下实验组小鼠进行拍摄,可见实验组小鼠左肾区域有特异性的光学信号;移植BMSCs后10天,IVIS对实验组小鼠的离体器官进行拍摄,可见实验组小鼠的左肾、左输尿管的光学信号较强,其肺、肝脏、左侧卵巢亦有光学信号。5.实验组小鼠左侧输尿管梗阻解除后的左输尿管复通率较对照组小鼠高(P=0.012)。结论:1.经肾动脉途径移植BMSCs是研究干细胞治疗输尿管梗阻性疾病的一种高效移植方式。2.BMSCs经肾动脉移植可以促进小鼠输尿管损伤的修复。图24幅,表8个,参考文献60篇
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