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先天性巨结肠症（Hirschsprung Disease）又称为肠无神经节细胞症,在消化道的先天性畸形中,发生率仅次于直肠肛门畸形,有家族性发病倾向。该疾病主要以病变肠段神经节细胞缺失,处于痉挛狭窄状态,丧失蠕动和排便等功能,致使肠管蓄便、积气,而继发扩张、肥厚。在先前的研究中,通过ENU诱变手段,本实验室获得一例隐性遗传的巨结肠症小鼠,利用乙酰胆碱酯酶染色法及肠管组织HE染色法发现异常肠管段神经节细胞缺失。通过突变基因定位及鉴定发现内皮素受体B基因（Ednrb）编码区第857位碱基出现T到C的转换,导致第286位亮氨酸被脯氨酸替代(该小鼠被命名为Ednrbmlyzcm).对C57BL/6J （B6）互交获得的B6纯合子观察中,我们发现在B6背景中各纯合子小鼠巨结肠症严重程度相似。对[C57BL/6J （B6）xDBA/2J（D2）]F1互交获得的F2突变纯合子观察发现小鼠巨结肠症严重程度不一且无性别差异,提示存在修饰基因的影响。本研究以上述突变系小鼠为对象,从以下3个部分开展：1.微卫星标记筛选利用MGI多态标记数据库（http://www. informatics.j ax.org/）,在小鼠的19对常染色体上,选择遗传距离平均在15 cM（厘摩）左右,B6及D2之间碱基差异尽量在10bp以上的微卫星标记110个,进行微卫星条件摸索。结果发现其中82个微卫星标记可用于后续QTL定位。2.QTL初步定位PCR酶切法确定F2代纯合子巨结肠症幼鼠93例,纯合子F2代小鼠出生5-10天内取小鼠的整段肠（十二指肠到直肠末段）组织进行乙酰酯酶染色,以神经节缺失肠段长度与整段肠长度的比值作为表型值。采用基因组扫描法,对F2代93例小鼠DNA样品分别用82对微卫星引物进行初步的QTL分析。结果显示在11号染色体和15号染色体上存在2个位点阂值超过0.630,LOD值都超过了2.52,提示11号及15号染色体上存在影响巨结肠症表型的QTL位点,位于微卫星D11Mit41位点和D15Mit265位点附近。3.部分QTL精确定位增加F2代纯合子巨结肠症幼鼠数量至152例,对11号染色体和15号染色体进行QTL精确定位。结果显示,QTL与D11Mit41位点附近处LOD值为5.36,与D11Mit338位点附近处LOD值为3.83,与D11Mit226位点附近处LOD值为1.95,与D15Mit265附近处LOD值为4.92。单基因QTL线性回归分析统计结果显示位点D11Mit226、D11Mit338和D22Mit41附近F2代纯合子小鼠中基因型为BB型的巨结肠症较为严重,而BD基因型时巨结肠症严重程度明显减轻,DD型严重程度最轻,说明在B6背景巨结肠症小鼠中引入11号染色体上DBA部分基因片段后巨结肠症严重程度明显减轻,提示11号染色体上DBA背景中存在有减轻巨结肠症严重程度的修饰基因。在D15Mit265位点附近基因型BB和DD型巨结肠症比较严重,而在BD基因型时巨结肠症严重程度明显减轻,提示15号染色体上存在有相关的调控基因的可能性。