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1目的溃疡性结肠炎（Ulcerative Colitis,UC）是一种慢性肠道炎症性疾病,发病率高。为寻找治疗UC作用的潜在药物,对苍术进行相关研究。通过对比苍术不同提取部位对DSS诱导小鼠结肠炎的改善作用,确定最佳有效部位。并进一步从体内和体外研究苍术改善UC的潜在机制。以期为苍术在临床上治疗UC的有效性提供数据参考,为进一步开发副作用小、作用强的抗UC药物奠定基础。2方法2.1苍术挥发油和醇提物改善UC药效比较研究将Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、苍术挥发油给药组、苍术醇提物给药组、柳氮磺吡啶给药组。正常组除外,其余组别小鼠饮用DSS溶液诱导溃疡性结肠炎模型,分别给予苍术挥发油、苍术醇提物和柳氮磺吡啶灌胃给药7天,以小鼠的体质量变化、DAI评分、结肠长度、脾脏系数、H＆E染色等为评价指标,确定苍术改善UC的最佳有效部位。2.2苍术醇提物对小鼠溃疡性结肠炎的药效确证研究将Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、苍术醇提物低剂量给药组、苍术醇提物高剂量给药组、柳氮磺吡啶给药组,正常组除外,其余组别小鼠饮用DSS溶液诱导溃疡性结肠炎模型,直观评价小鼠的体质量变化、DAI评分、结肠长度、脾脏系数,试剂盒检测结肠组织MPO活性、H＆E染色观察结肠组织病理损伤情况、免疫组织化学法检测结肠TNF-α、IL-1β和IL-6表达情况,进一步确证苍术醇提物对UC的药效作用。2.3苍术醇提物对小鼠溃疡性结肠炎的作用机制研究对2.2药效研究中的正常组、模型组、苍术醇提物低剂量给药组、苍术醇提物高剂量给药组和柳氮磺吡啶给药组小鼠结肠组织中杯状细胞数量、紧密连接蛋白ZO-1及Occludin进行检测,明确苍术醇提物对UC小鼠肠道屏障的保护和改善作用。对各组小鼠结肠组织中MAPK和NF-κB信号通路关键蛋白进行检测,考察苍术醇提物对该信号通路被激活后的抑制作用,明确苍术醇提物的抗炎作用。2.4苍术醇提物体外抗炎活性及机制研究以RAW264.7细胞为研究对象,考察苍术醇提物对RAW264.7细胞的毒性作用,确定细胞实验给药浓度。以LPS诱导的RAW264.7细胞为体外炎症模型,经不同浓度苍术醇提物给药后,检测细胞上清中NO、PGE2的含量,炎症介质和炎症因子的转录表达水平,明确苍术醇提物体外抗炎活性强弱。检测LPS诱导的RAW264.7细胞经苍术醇提物给药后MAPK和NF-κB信号通路关键蛋白的表达水平,明确苍术醇提物发挥抗炎作用的潜在机制。3结果3.1苍术挥发油和醇提物改善UC药效比较研究Balb/c小鼠经造模后,与正常组比较,其体质量在第7、8天表现出显著性下降（P＜0.05）,疾病活动指数在第5、6、7、8天表现出显著性升高（P＜0.05）,结肠长度显著性缩短（P＜0.05）,脾脏系数显著性升高（P＜0.05）,结肠组织结构显现出严重损伤。与模型组相比,各给药组小鼠体质量下降程度减轻,疾病活动指数在部分天数显著性降低（P＜0.05）,结肠长度缩短得到显著性抑制（P＜0.05）,脾脏系数显著性降低（P＜0.05）,结肠组织结构损伤得到恢复。与苍术挥发油给药组相比,苍术醇提物给药组小鼠大部分指标恢复效果更佳。3.2苍术醇提物对小鼠溃疡性结肠炎的药效确证研究Balb/c小鼠经造模后,与正常组比较,其体质量在第5、6、7、8天显著性下降（P＜0.05）,疾病活动指数在第5、6、7、8天中显著性升高（P＜0.05）,结肠长度显著性缩短（P＜0.05）,脾脏系数显著性升高（P＜0.05）,结肠组织中MPO活性显著性升高（P＜0.05）,结肠组织结构显现出严重损伤,炎症因子的转录水平显著性升高（P＜0.05）,结肠组织中炎症因子分泌增多。与模型组比较,各给药组体质量下降减缓,DAI评分在部分天数显著性降低（P＜0.05）,结肠长度缩短程度变小,脾脏系数显著性降低（P＜0.05）,结肠组织MPO活性显著性降低（P＜0.05）,结肠组织结构损伤得到恢复,炎症因子的转录水平显著性降低（P＜0.05）,结肠组织中炎症因子分泌减少。相较于苍术醇提物低剂量给药组,苍术醇提物高剂量给药组对各指标的改善作用更佳。3.3苍术醇提物对小鼠溃疡性结肠炎的作用机制研究与正常组比较,模型组小鼠结肠组织中杯状细胞数目明显减少,ZO-1和Occludin蛋白表达显著性降低（P＜0.05）,NF-κB和MAPK信号通路被激活;与模型组比较,各给药组中小鼠结肠组织杯状细胞数目增多,ZO-1和Occludin蛋白表达显著性升高（P＜0.05）,MAPK和NF-κB信号通路激活被抑制。此外,与苍术醇提物低剂量给药组比较,苍术醇提物高剂量给药组ZO-1和Occludin蛋白表达水平更高,MAPK和NF-κB信号通路被抑制更明显。3.4苍术醇提物体外抗炎活性及机制研究LPS诱导的RAW264.7细胞,细胞上清液中NO和PGE2含量显著性升高（P＜0.05）,细胞中i NOS和COX-2的转录水平显著性升高（P＜0.05）,炎症因子的转录水平显著性升高（P＜0.05）,MAPK和NF-κB信号通路被激活。经苍术醇提物给药后,细胞上清液中NO和PGE2含量明显降低,细胞中i NOS和COX-2的转录水平明显降低,炎症因子的转录水平明显降低,MAPK和NF-κB信号通路激活被抑制。4结论本研究通过以DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎为模型,经苍术不同提取部位给药后,证明了苍术对小鼠溃疡性结肠炎的改善作用并确定了苍术醇提物部位是最佳有效部位,进一步以更全面的药效指标进行考察,明确了苍术醇提物对小鼠溃疡性结肠炎的改善作用,并探索了该作用的分子机制,明确苍术醇提物通过保护和修复肠道屏障,抑制MAPK和NF-κB信号通路的激活从而抑制炎症反应来改善小鼠溃疡性结肠炎。体外实验亦表明,抑制MAPK和NF-κB信号通路的激活而抑制炎症反应,可能是苍术醇提物发挥改善UC的潜在分子机制。本研究为苍术临床应用于治疗UC提供实验依据,为进一步开发治疗UC的潜在药物提供参考。