卡托普利对幼鼠心脏成纤维细胞衰老的影响

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目的:心脏成纤维细胞(Cardiac fibroblasts, CFs)占心脏间质细胞的90%以上,在心脏的正常生长和病理重塑中起重要作用。心脏成纤维细胞的异常增殖促进心室重塑的发展,加速心衰的进程。因此,应用药物,抑制CFs的增殖,加速CFs的衰老,将会减缓心肌纤维化的进程。卡托普利临床应用广泛,目前已有研究证明,卡托普利(captopril,Cap)可以延缓心肌纤维化,改善心室重塑,阻止心力衰竭的进展。但其分子机制尚不明确。本实验拟在细胞水平,观察卡托普利对幼鼠心脏成纤维细胞衰老的影响,明确卡托普利是否会加速CFs的衰老,在细胞水平明确卡托普利延缓心肌纤维化,改善心室重塑的机制。方法:原代培养SD大鼠幼鼠心脏成纤维细胞。经3次传代后,已纯化为心脏成纤维细胞,实验选用4-7代细胞。分别以1mg/l、5mg/l及10mg/l卡托普利作用于CFs72h。然后使用流式荧光原位杂交法(Flow-Fish)检测CFs端粒长度的变化;进行衰老相关的β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色;以流式细胞仪检测CFs细胞周期的情况;电镜下观察各组CFs线粒体损伤情况。以10g/L D-gal作用于CFs72h,建立CFs衰老模型,以1mg/l卡托普利作用于该模型,Flow-Fish法检测CFs端粒长度的变化,以流式细胞仪检测细胞周期的情况。结果:1. 5mg/l及10mg/l卡托普利均可以导致心脏成纤维细胞端粒的缩短,且随着卡托普利浓度的增加,细胞端粒的缩短更为明显(P<0.001)。1mg/l卡托普利组与对照组比较端粒长度无明显变化(P=0.882)。2. 5mg/l,及10mg/l卡托普利组出现细胞内蓝染颗粒的堆积,SA-β-gal染色阳性。1mg/l组细胞与对照组,其SA-β-gal染色阴性。3. 5mg/l及10mg/l卡托普利组细胞周期G1期比例较对照组及1mg/l组明显升高(P<0.001)。4.电镜下观察5mg/l及10mg/l卡托普利处理后心脏成纤维细胞线粒体部分嵴消失,形成髓鞘样结构。线粒体损伤明显,且10mg/l组较5mg/l组线粒体损伤重。1mg/l
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