通过iPSCs技术获得iPSCs，建立个体特异的多能干细胞系，可为生长发育、种质资源保护、疾病防治及药物筛选研究等提供宝贵的实验材料，是一条新的从根本上解决大黄鱼养殖中的各种难题的有效策略模式。其中，多能性因子对iPSCs技术的研究是必不可少的，它们在调控胚胎干细胞(ESCs)的自我更新和多能性、原始生殖细胞(PGCs)的形成、早期胚胎发育、生殖细胞发生、器官发生、再生及增殖、生长、分化、凋亡等细胞过程等方面发挥重要作用。然而关于大黄鱼多能性因子的研究尚属空白。本文采用SMART-RACE技术克隆了大黄鱼Oct4、Sox2、Klf4和cMyc四个多能性基因，并进行了生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术和原位杂交技术研究了大黄鱼四个多能性基因的时空表达模式;还对组织细胞培养和基因转染进行了初步研究。主要研究成果如下:　　1.克隆获得了大黄鱼Oct4、Sox2、Klf4和cMyc4个多能性基因。Lc-Oct4基因cDNA全长2642bp，5端非编码区(5 UTR)长623bp，3UTR长567bp，开放阅读框(ORF)编码一个476个氨基酸(aa)的蛋白，Lc-Oct4蛋白的N-端和C-端各有一个保守的DNA结合区—POUs区和HOX区;系统进化分析表明，大黄鱼Lc-Oct4蛋白序列与硬骨鱼的一致性高(65-85％)，与四足动物的一致性低(38-65％)，在进化树上大黄鱼Lc-Oct4蛋白最先与半滑舌鳎（Cynoglossussemilaevis）聚支。Lc-Sox2基因cDNA全长2135bp，5UTR长498bp，3 UTR长646bp，ORF编码一个322aa的蛋白，Lc-Sox2蛋白具有一个高度保守的DNA结合区—HMG盒;系统进化分析表明，Lc-Sox2蛋白序列在脊椎动物中的一致性都很高(77-98％)，进化树上Lc-Sox2蛋白最先与红鳍东方鲀（Takifugu rubripes）聚支。Lc-Klf4基因cDNA全长2404bp，5UTR长255bp，3UTR长790bp，ORF编码一个452aa的蛋白，Lc-Klf4蛋白具有三个高度保守的DNA结合区—C2H2锌指结构;系统进化分析表明，Lc-Klf4蛋白序列与硬骨鱼的一致性高(66-93％)，与四足动物的一致性低(＜48％)，进化树上Lc-Klf4蛋白最先与深裂眶锯雀鲷（Stegastes partitu）聚支。Lc-cMy基因cDNA全长2089bp，5UTR长338bp，3UTR长408bp，ORF编码一个440aa的蛋白，Lc-cMyc蛋白具有一个特征性的高度保守的HLH-LZ作为DNA结合区;系统进化分析表明，Lc-cMyc蛋白序列与硬骨鱼的一致性高(71-91％)，与四足动物的一致性低(54-60％)，进化树上Lc-cMyc蛋白最先与舌齿鲈（Dicentrarchus labrax）和革首南极鱼（Nototheniacoriiceps）聚支。　　2.组织表达:qRT-PCR分析显示，Lc-Oct4基因在大黄鱼卵巢中呈现超高量的表达，并在635dph卵巢中的表达量最高;原位杂交结果也表明，Lc-Oct4基因主要分布于不同发育阶段卵母细胞的细胞质中，并在第Ⅱ期晚期和第Ⅲ期卵母细胞中的表达水平最高;Lc-Oct4基因在精原细胞和初级精母细胞中也有一定量的表达。Lc-Sox2基因主要高表达于脑、鳃、胃、性腺中，且在脑和眼中的表达具有性别差异，雌性高于雄性。Lc-Klf4基因在组织中广泛表达且具有性别差异，在雌鱼中的表达水平依次为脑＞鳃＞眼＞心，在雄鱼中为心＞精巢＞鳃＞脑，其中，在心、鳃、精巢中的表达为雄鱼＞雌鱼，在眼中则为雌鱼＞雄鱼;Lc-Klf4基因在精巢中的表达以635dph中的水平最高，且主要分布于精母细胞中。Lc-cMyc基因表达的性别差异仅存在于性腺中，Lc-cMyc基因特异性地极高量表达于卵巢中，且在635dph卵巢中的表达水平最高，主要分布于第Ⅱ期晚期和第Ⅲ期早期卵母细胞的细胞质中;在头肾和精巢中也有一定量的表达。　　3.胚胎表达:qRT-PCR分析表明，Lc-Oct4基因在胚胎发育过程中的表达水平依次为多细胞期＞囊胚期=原肠胚期;整胚原位杂交(WISH)结果也显示，Lc-Oct4基因仅在从2-细胞期至早期原肠胚的早期胚胎发育阶段表达，且在16-细胞期达到峰值。Lc-Sox2基因属于合子型的表达模式，从囊胚期开始呈动态的表达，其中在原肠胚期和胚孔封闭期的表达量水平高，在孵出后1天的仔鱼中Lc-Sox2基因主要表达于胚胎的头部和PGCs区。Lc-Klf4基因呈现合子型的表达模式，从原肠胚晚期开始表达，在胚孔封闭期、眼泡出现期和晶体出现期中的表达水平高;WISH结果也显示，Lc-Klf4基因主要分布于晚期胚胎的背部和头部。Lc-cMyc基因在各胚胎期中均有不同程度的表达，在早期胚胎发生中（2-细胞期—多细胞期），Lc-cMyc基因的表达水平非常高，在2-细胞期达到峰值;在胚胎发生晚期（囊胚期—孵出后1天的仔鱼），Lc-cMyc基因的表达水平依次为孵出后1天的仔鱼＞孵出前期＞眼泡出现期=多细胞期＞心跳期，随着胚胎的发育，Lc-cMyc基因逐渐向胚胎背部聚集，最后主要分布于胚胎头部。　　4.采用Lipofectamine2000脂质体将pAc5.1B-EGFP质粒成功转染到大黄鱼肝脏和脾脏的原代细胞中，转染率达到25-30％。