目的：骨肉瘤是临床中最常见的原发骨肿瘤，多发于青少年，恶性度高，早期易发生肺转移，随着化疗剂量密度的提高，预后逐渐有所改善，5年生存率约为70%。传统认为骨肉瘤对放疗不敏感，但随着放射生物学认识的深入，人们发现如果放射剂量足够大，多种以往认为不敏感的肿瘤仍可通过放疗以取得良好的疗效。近年来以图像引导适形放疗（IGRT）为主的精确放疗的开展，给提高放射剂量带来了希望。另外不可忽视的一点是更多放射增敏药物的发现也明显提高了放疗的疗效。紫杉醇(paclitaxel，PTX)、吡柔比星(herarubicin，THP)均是骨肉瘤治疗常用的化疗药物，具有将细胞阻滞在特定细胞周期的作用。基于此本课题除了研究紫杉醇、吡柔比星对骨肉瘤细胞MG-63的生长抑制作用，还重点对两种药物单用及联合使用对MG-63细胞的放射增敏作用、及其与药物作用时间的关系，并对其作用机制进行初步探讨，以期为临床提供更多的理论依据。方法：无菌实验室中将MG-63细胞置于37℃、饱和湿度5%CO2、10%胎牛血清的DMEM培养液中常规培养，取对数期细胞用于实验。1光镜观察：将不同浓度的紫杉醇和吡柔比星作用于MG-63细胞，在倒置相差显微镜下定时观察细胞的生长情况并照相。2细胞生长抑制试验：将细胞用胰酶消化后调整至3×104/ml，接种于96孔培养板，每孔100μl，培养至细胞贴壁，加入不同浓度PTX(6、0.6、0.06、0.006、0.0006μg/ml)和THP (10、1、0.1、0.01、0.001μg/ml)，置37℃培养箱培养24h后每孔加入新鲜配制的MTT再次孵育4h，弃去上清液，加入DMSO震荡10min，于酶标仪上测定各孔吸光度（测定波长520nm）并计算IC10。3克隆形成实验：细胞在各组药物作用24h后给予不同剂量（0、2、4、6、8Gy）照射以及药物作用不同时间（0、12、24、36h）后给予X线（4Gy）照射，10-14天后计数肉眼可见的细胞集落，计算出细胞的存活分数(surviving fraction，SF)并拟合细胞生存曲线。根据拟合参数计算放射增敏比（sensitivity enhancement ratio，SER)。并比较各组药物作用于MG-63细胞不同时间后进行照射细胞生存率的变化，确定最佳照射时间。4流式细胞技术：将MG-63细胞随机分为5组，对照组不加任何处理，单纯照射组仅给予6Gy X线照射， PTX+照射组、THP+照射组及两药联合+照射组分别用药物处理24h更换不含药物的培养基并照射6Gy。以上五组共同孵育24h，常规消化离心，弃上清，PBS清洗2遍，加入冰预冷的70％乙醇4℃固定过夜，离心去乙醇，PBS清洗2遍，取足量细胞直接PI染色，另取足量细胞分别加入不同鼠抗人抗体工作液（bcl-2、bax、caspase-3）及羊抗鼠FIFT-IgG二抗工作液，最后用流式细胞仪检测细胞周期分布和相关凋亡蛋白bcl-2、bax、caspase-3的表达水平。结果：1倒置相差显微镜下观察可见经PTX和THP作用的MG-63细胞，开始以三角形、多边形、梭形细胞为主，生长良好。细胞随时间的延长及浓度的增加，梭形逐渐增多，最后变为圆形。细胞贴壁能力逐渐减弱，漂浮细胞增多。细胞体积普遍变小，胞质浓缩，胞膜不完整。最后部分细胞漂浮，部分贴壁细胞碎裂，其余贴壁细胞较对照组生长明显缓慢。2不同浓度紫杉醇、吡柔比星作用24h后，MG-63细胞抑制率逐渐增高（P<0.05），其药物毒性呈浓度依赖性，IC10分别为0.01μg/ml和0.004μg/ml。3紫杉醇、吡柔比星及两药联合放射増敏比D0比分别1.14、1.49和0.97，Dq比分别为1.17、1.06和40.33，SF2比分别为1.08、1.04和1.61。IC10浓度各组药物作用于MG-63细胞不同时间后再进行照射，细胞存活分数随时间延长逐渐降低（P<0.05），二者呈正相关。12h后照射吡柔比星单药组细胞存活最少，24h后照射两药联合组细胞存活最少（P<0.05）。4流式细胞仪检测显示紫杉醇、吡柔比星单药以及两药联合作用于MG-63细胞后进行射线照射均可使G2/M期细胞比例升高，细胞凋亡增多，相关凋亡蛋白（bcl-2、bax、caspase-3）表达上调（P<0.05），bcl-2/bax比值降低，两药联合为著。结论：1紫杉醇及吡柔比星对MG-63细胞均有明显抑制作用，抑制效应随药物浓度的增加而提高，显示其药物毒性呈浓度依赖性。2紫杉醇、吡柔比星单药及联合使用对MG-63细胞均有放射增敏作用，两药联合增敏作用增强，增敏效果与药物作用时间呈正相关。3其增敏机制可能与紫杉醇和吡柔比星导致的细胞G2/M期阻滞以及细胞凋亡蛋白表达增强有关。