论文部分内容阅读
目的1、研究FXR、SREBP-1c、FAS基因及蛋白在非酒精性脂肪变性肝细胞模型中的表达。2、观察盐酸小檗碱对脂肪变性肝细胞内甘油三脂的影响和对FXR、SREBP-1c、FAS基因及蛋白表达的影响方法1、将HepG2细胞分为正常组、模型组,模型组用油酸(oleic acid, OA)处理24h,建立非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)模型,正常组予以高糖DMEM培养,采取油红0染色的方法和测定肝细胞内甘油三酯含量来观察肝细胞内脂肪变性情况:用RT-PCR和Western Blot检测FXR、SREBP-1c、FAS基因及蛋白表达的变化。2、将HepG2细胞分为正常组、模型组、小檗碱低剂量组、小檗碱中剂量组、小檗碱高剂量组,利用油红0染色及肝细胞内甘油三酯含量测定观察肝细胞内脂肪变性情况,应用RT-PCR和Western Blotting法检测FXR、SREBP-1c、FAS基因及蛋白表达的变化。结果1、1mmol/L油酸成功诱导出NAFLD细胞模型,油红O染色见HepG2细胞内脂滴明显增多,细胞内甘油三脂含量明显增加(p<0.01)。油酸诱导24h后,HepG2细胞FXR mRNA及蛋白表达水平较正常对照组显著下降(p<0.01),SREBP-1c、FAS mRNA及蛋白表达水平较正常对照组显著上调(p<0.01)。2、经不同浓度(低、中、高)小檗碱干预24h后,油红0染色提示脂肪变性肝细胞内TG含量较模型组显著减少,差异具有统计学意义(p<0.05);与OA组相比,加入不同剂量的小檗碱干预后,肝细胞内FXR mRNA及蛋白表达较模型组显著上调(p<0.01), SREBP-1c、FAS mRNA及蛋白表达显著下调,并呈剂量依赖性,差异具有统计学意义(p<0.01)。结论1、证实NAFLD细胞模型FXR表达量减少,SREBP-1c、FAS表达量增加,为深入研究儿童NAFLD的治疗提供实验基础。2、小檗碱能够减轻OA诱导的HepG2细胞脂肪变性;且小檗碱能够上调FXR的表达,下调SREBP-1c、FAS的表达,从而改善高脂诱导的肝细胞脂肪变性,表明小檗碱改善肝脏脂肪变性可能是通过FXR/SREBP-1c/FAS信号通路来实现。