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目的:建立HPLC分析方法,构建红藤贞芪扶正颗粒(HT185)HPLC指纹图谱,分析不同批次HT185的HPLC指纹图谱,评价HT185药物质量的可控性;通过体内实验,研究HT185对5-氟尿嘧啶(5-FU)化疗大肠癌小鼠所致空肠损伤的保护作用研究,为HT185进一步的药物研发、临床应用提供实验基础。方法:通过HPLC分析方法构建HT185的HPLC指纹图谱,测定HT185不同批次指纹图谱,运用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对不同批次HT185的HPLC色谱图进行相似度计算,评价不同批次HT185的质量。体内动物实验,将处于对数生长期的鼠源性结肠癌CT-26细胞制成单细胞悬液,台盼蓝染色法对细胞进行计数,细胞数量以2×106/mL密度与基质胶按等比例混合后,采取皮下接种法将CT-26细胞接种于BABL/c小鼠右前腋窝下,建立大肠癌皮下移植瘤动物模型。通过瘤体体积公式计算,待瘤体体积长至100-150mm3时按瘤体体积的大小将小鼠随机均分为4组,包括对照组、HT185组、5-FU组、5-FU+HT185组,每组10只。并分别用5-FU(100mg/kg)和HT185(12.4g/kg)进行干预。其中,5-FU分别在分组当天和之后每隔一周进行腹腔注射1次,共3次;HT185于分组当天进行灌胃,1次/天,连续给药18天。对照组和HT185组分别给予灌胃和腹腔注射方式等容积的生理盐水。每天称量各组小鼠的体重,并做好记录。每天观察各组小鼠的腹泻情况,根据腹泻评分指数进行评分比较。于第19天采用颈椎脱臼法处死小鼠,分离空肠组织,用4%多聚甲醛固定,石蜡包埋,切4μm厚度制作石蜡切片。随后,采用苏木素-伊红染色法观察HT185对空肠组织病理形态学改变的影响,并根据Macpherson and Pfeiffer肠组织病理学评分标准对小鼠空肠组织病理形态学的改变进行分级;采用TUNEL法检测HT185对5-FU引起的肠道细胞凋亡的影响;采用免疫组织化学染色法(IHC)检测HT185对空肠腺隐窝细胞中Bcl-2和Bax在蛋白水平表达的影响。结果:1.建立了 HT185指纹图谱,对不同批次HT185进行HPLC指纹图谱分析相似度较高,药物成分稳定,HT185药物质量可控。2.与对照组和HT185药物组相比,5-FU组小鼠的体重下降明显,且大多数在注射5-FU后的第三天出现腹泻症状;石蜡组织病理切片可以明显的观察到不同程度的肠道黏膜损伤,如肠绒毛排列不整齐、断裂,炎性细胞浸润,肠上皮细胞、固有层水肿等;TUNEL实验结果通过镜下观察空肠腺隐窝细胞发生大量凋亡(P<0.05);免疫组织化学染色实验结果显示空肠腺隐窝细胞中Bcl-2的表达显著下降(P<0.05),Bax的表达明显升高(P<0.05);与5-FU组相比,5-FU+HT185对小鼠的体重减轻的状况无明显改善作用(P>0.05),但能够明显降低腹泻发生率(P<0.05),空肠组织黏膜损伤程度减轻;空肠腺隐窝细胞凋亡数量明显减少(P<0.05),Bcl-2蛋白的表达明显升高,Bax蛋白的表达明显下降(P<0.05)。3.对照组与HT185比较,小鼠平均体重、空肠组织黏膜损伤程度、空肠腺隐窝细胞凋亡情况均无显著性差异(P>0.05),无腹泻症状出现(P>0.05)。结论:1.建立HT185指纹图谱,对不同批次HT185的HPLC指纹图谱分析,经过相似度的计算,HT185质量可控。2.HT185对5-FU诱导的空肠损伤具有保护作用,能够显著的改善小鼠腹泻状况、减轻空肠组织黏膜损伤程度。3.HT185可以减少空肠腺隐窝细胞的凋亡,调节与线粒体凋亡途径相关蛋白Bcl-2和Bax的表达,进而保护5-FU诱导的空肠损伤,这可能是HT185对5-FU诱导空肠损伤的保护作用机制之一。