Notch1信号通路通过靶向GLUT1调控人胃癌细胞增殖、迁移、侵袭及自噬水平的研究

来源 :福建医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dfklfgkffh
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:在细胞水平探究Notch1信号通路对人胃癌MKN-45、MGC-803细胞GLUT1表达及功能的影响,初步探讨Notch1是否能通过GLUT1调控胃癌细胞自噬水平。方法:研究Notch1敲除对胃癌细胞GLUT1(SLC2A1)表达及葡萄糖摄取能力的影响时,将细胞分为3组:空白对照组(Blank组),不做任何处理的野生型胃癌细胞;(2)阴性对照组(NC组),阴性对照病毒sg RNA-CON250感染的胃癌细胞;(3)Notch1基因敲除组(KO组),LV-Notch1-sg RNA感染的胃癌细胞。研究GLUT1过表达对Notch1敲除所造成的细胞增殖、迁移、侵袭及自噬水平变化的影响时,将细胞分为3组:阴性对照组(NC’组),阴性对照病毒CON335感染NC组胃癌细胞;Notch1基因敲除组(KO’组),阴性对照病毒CON335感染KO组胃癌细胞;Notch1敲除联合GLUT1过表达组(KO+OE组),LV-SLC2A1 27247-2感染KO组胃癌细胞。应用WB、qRT-PCR检测各组Notch1、GLUT1表达情况,应用葡萄糖检测试剂盒测定葡萄糖摄取能力,CCK-8法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,transwell检测细胞迁移及侵袭能力,应用WB、qRT-PCR检测自噬相关基因表达情况。结果:1、Notch1敲除后,Western blot检测发现MKN-45、MGC-803细胞KO组GLUT1蛋白相对表达量明显低于NC组,差异均有统计学意义(t=5.296、32.843,P=0.006、0.000)。qRT-PCR检测发现MKN-45、MGC-803细胞KO组SLC2A1 mRNA相对表达量明显低于NC组,差异均有统计学意义(t=22.371、8.647,P=0.000、0.001)。葡萄糖摄取能力测定结果显示MKN-45、MGC-803细胞KO组葡萄糖摄取能力明显低于NC组,差异均有统计学意义(t=10.046、4.298,P=0.001、0.013)。2、Notch1敲除的基础上同时过表达GLUT1,CCK-8法检测细胞增殖能力。MKN-45、MGC-803细胞KO’组增殖能力明显低于NC’组,差异均有统计学意义(t=9.925、19.713,P=0.001、0.000);KO+OE组明显高于KO’组,差异均有统计学意义(t=-10.175、-3.430,P=0.000、0.009)。3、划痕实验见MKN-45、MGC-803细胞KO’组划痕愈合百分比明显低于NC’组,差异均有统计学意义(t=12.739、14.120,P=0.005、0.000);KO+OE组明显高于KO’组,差异均有统计学意义(t=-15.377、-10.532,P=0.000、0.000)。4、Transwell实验发现MKN-45细胞KO’组迁移、侵袭能力明显低于NC’组,差异均有统计学意义(t=15.661、15.940,P=0.000、0.004);KO+OE组迁移、侵袭能力明显高于KO’组,差异均有统计学意义(t=-5.275、-7.560,P=0.006、0.002)。MGC-803细胞KO’组迁移、侵袭能力明显低于NC’组,差异均有统计学意义(t=48.866、61.363,P=0.000、0.000);KO+OE组迁移、侵袭能力明显高于KO’组,差异均有统计学意义(t=-4.627、-11.385,P=0.010、0.000)。5、WB结果显示自噬标志性蛋白LC3Ⅱ的相对表达量,MKN-45、MGC-803细胞KO’组明显高于NC’组,差异均有统计学意义(t=-13.302、-8.760,P=0.006、0.001);KO+OE组明显低于KO’组,差异均有统计学意义(t=4.601、4.551,P=0.010、0.010)。Beclin1蛋白相对表达量,MKN-45、MGC-803细胞KO’组明显高于NC’组,差异均有统计学意义(t=-7.329、-4.058,P=0.018、0.015);KO+OE组明显低于KO’组,差异均有统计学意义(t=3.096、3.492,P=0.036、0.025)。ATG16L1蛋白相对表达量,MKN-45、MGC-803细胞KO’组明显高于NC’组,差异均有统计学意义(t=-8.091、-20.345,P=0.015、0.002);KO+OE组明显低于KO’组,差异均有统计学意义(t=9.400、7.074,P=0.001、0.002)。qRT-PCR结果表明MKN-45、MGC-803细胞自噬相关基因ATG7的mRNA相对表达量KO’组明显高于NC’组,差异均有统计学意义(t=-13.400、-12.045,P=0.006、0.000);KO+OE组明显低于KO’组,差异均有统计学意义(t=3.632、3.575,P=0.022、0.023)。ATG12 mRNA相对表达量,MKN-45、MGC-803细胞KO’组明显高于NC’组,差异均有统计学意义(t=-14.807、-12.487,P=0.000、0.006);KO+OE组明显低于KO’组,差异均有统计学意义(t=2.966、5.920,P=0.041、0.004)。结论:Notch1敲除可以抑制胃癌MKN-45、MGC-803细胞GLUT1的表达,进而抑制细胞增殖、迁移、侵袭及葡萄糖摄取,增强细胞自噬水平。在胃癌细胞中,GLUT1参与了Notch1信号通路对自噬的调控。
其他文献
学位
【目的】自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)是机体中固有免疫系统的关键效应细胞,在机体抑制微生物感染方面起着重要作用,是阻止肿瘤发生和发展的第一道防线。NKG2D Ligands(NKG2DLs)是NK细胞识别和杀伤肿瘤的关键配体。健康细胞表面表达NKG2DLs相对较低,当细胞发生恶性转化,其在肿瘤细胞表面表达上调。NK细胞就能通过NKG2D与配体结合并杀伤肿瘤细胞。然而,
目的:索拉非尼(sorafenib)是批准用于晚期肝细胞癌(HCC)全身治疗的一线药物,但耐药和不良反应等问题限制了其临床治疗效果。由于HCC的发生发展常伴随炎症,在改善sorafenib耐药的方案中,与其他治疗药物联用,特别是抗炎药物,是目前探索的方向之一。2,5-二甲基塞来昔布(DMC)是塞来昔布(celecoxib)的衍生物,靶向抑制膜结合型PGE2合成酶1(mPGES-1),不具备COX-
学位
学位
目的:婴幼儿血管瘤(IH)主要表现大量异常血管的快速生成,而CD93是最新发现的促血管生成因子,已被发现在多种恶性肿瘤中高表达从而促进肿瘤血管生成。本研究旨在探究CD93是否通过促进血管形成方式促进IH的发生与发展,进一步验证CD93多克隆抗体能否抑制血管瘤干细胞(Hem SCs)的血管形成功能,评估CD93是否可作为IH抗血管生成治疗的新靶标。方法:(1)通过组织免疫荧光方法检测CD93在IH组
目的:探究消化道恶性肿瘤术后发生急性肾损伤的发生率及危险因素,分析消化道恶性肿瘤麻醉手术期较为合适的麻醉处理方案。方法:收集2017年6月1日至2019年10月31日于福建医科大学附属协和医院择期行食道及胃肠恶性肿瘤手术的患者,根据纳入标准和排除标准选择研究对象。术后急性肾损伤诊断标准采用KDIGO标准。本研究使用单因素分析及二元Logistic多因素回归分析,确定与术后发生AKI相关的围术期因素
65Mn钢的强度、硬度和弹性等均优于65钢,可用作小尺寸弹簧、锯片和刀具等。65Mn钢中夹杂物对钢材的性能和使用寿命有很大影响。为控制影响65Mn钢性能的主要夹杂物种类和等级,现以65Mn小方坯连铸工艺为基础。利用徕卡金相显微镜在400倍下检测LF精炼进站、出站和中间包处的夹杂物的低倍组织和形状,结合扫描电镜检测可以确定最终影响铸坯质量的夹杂物类型。分析实际生产工艺下65Mn钢的低倍组织及夹杂物级
学位
目的:粗粱-团块型肝细胞癌(MTM-HCC)是一种表现为明显侵袭性的肝细胞癌亚型,与患者较差的预后和生存结局有关。本研究旨在构建一种基于多期磁共振成像(MRI)的影像组学诺莫图模型,用于术前预测粗粱-团块亚型肝细胞癌。材料与方法:本研究连续性收集2017年6月至2020年6月经病理组织学证实的肝细胞癌患者88例,包括32例MTM-HCCs和56例非MTM-HCCs。所有患者均在术前行3.0T钆贝葡