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背景：慢性粒细胞白血病(Chronic Myelocytic Leukemia，CML)是一种致命性的恶性造血干细胞疾病，发生源于人9号和22号染色体的易位，导致费城染色体t(9;22)(q34;q11)和融合蛋白P210BCR/ABL的形成。P210BCR/ABL显示异常增强的酪氨酸激酶活性，过度激活下游Ras、PI3K/Akt等信号通路导致肿瘤的发生。FoxO蛋白家族作为转录因子通过调节细胞内多种重要基因的表达，而介导细胞周期、DNA损伤修复、凋亡、氧化应激、细胞分化代谢等细胞生理过程，与肿瘤的发生关系密切。hSHIP(Human SH2-containing inositol-5-phosphatase)属于肌醇磷酸酯酶家族，含SH2结构域肌醇磷酸酯酶能通过负调控PI3K/Akt信号通路对造血细胞增殖、存活及终末细胞活化起作用。本文主要通过血清剥夺实验及转染hSHIP基因入K562细胞，以探讨hSHIP基因、PI3K/Akt信号通路对FoxO3a表达含量调节和细胞定位的改变及可能的机制；并构建特异性干扰FoxO3a的shRNA真核表达载体转染K562，探究干扰FoxO3a的表达对K562细胞生存及凋亡的影响。
方法：免疫组化法检测FoxO3a的细胞定位改变；转化提取含hSHIP基因的pcDNA3.1-GFP-hSHIP真核表达载体，用脂质体法转染K562细胞。采用荧光显微镜观察转染效果，半定量RT-PCR法及western blotting检测FoxO3a、Akt的mRNA及蛋白表达含量及磷酸化变化；合成特异性干扰FoxO3a的shRNA，将其插入pRNA-U6.1/Neo载体，构建pRNA-U6.1/Neo-FoxO3a干扰质粒，用脂质体法转染K562细胞，western blotting检测干扰效率。Hoechst33258/PI双染色法分析细胞凋亡；MTT法检测细胞生长影响。
结果：免疫组化实验证明，血清激活PI3K/Akt信号通路可导致FoxO3a蛋白由胞核重定位于胞浆；转染了hSHIP基因的K562细胞株(K562/hSHIP-GFP)与对照组(K562/GFP)相比，AktmRNA、总Akt蛋白及Akt磷酸化水平明显下调，FoxO3a蛋白的mRNA及蛋白含量明显增高；成功构建pRNA-U6.1/Neo-FoxO3a干扰质粒并转染K562细胞，结果显示FoxO3amRNA及蛋白的表达含量明显减少。与对照组相比，Hoechst33258/PI检测显示干扰组细胞凋亡明显减少；MTT法显示K562细胞生长显著增加。
结论：转染hSHIP基因能明显增加FoxO3a的表达量，减少Akt的表达及降低其磷酸化。hSHIP基因能提高FoxO3a的表达机制可能是负调控PI3K/Akt信号通路；构建的pRNA-U6.1/Neo-FoxO3a质粒能明显减少K562细胞内的FoxO3a蛋白表达，干扰效果确切。干扰FoxO3a表达促使K562细胞的增殖存活并抑制细胞凋亡。提示FoxO3a有抑制K562细胞的增殖，同时促进凋亡的作用。