龙眼核多酚的分离纯化及抗氧化性能的研究

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龙眼核中含有多种活性多酚,但一直以来未得到充分开发与利用。多酚作为一种天然活性成分,具有良好的抗氧化性能。其可以减少由细胞代谢、外界刺激和人们不健康的饮食习惯、生活习惯而产生的过量自由基,从而起到延缓衰老和减少疾病发生的作用。本文采用多种分离纯化手段得到龙眼核中主要多酚组分,使用超高效液相色谱-质谱联用仪(UPLC-MS)对其进行定性定量分析,通过体外化学法和以皮肤成纤维(HSF)细胞为模型的体外细胞法共同测定其抗氧化能力,以拓展龙眼核多酚在化妆品中的应用。主要研究内容如下:首先,采用超声波辅助提取法提取龙眼核中多酚,通过单因素试验优化龙眼核多酚的提取条件。结果表明,在乙醇体积分数60%,料液比1/25(g/mL),温度70oC,时间60 min的条件下,龙眼核多酚提取量最高,为53.68 mg/g,得率为12.08%。其次,比较三氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇对龙眼核多酚粗提液的萃取结果,表明乙酸乙酯相富集了龙眼核中的主要多酚,其多酚含量为663.50 mg/g。乙酸乙酯相的体外化学法测定的结果显示,其ABTS·和OH·的半抑制浓度(IC50)分别为69.11μg/mL和73.83±6.02μg/mL,比VC的清除能力强;DPPH·的清除能力与还原能力较差异不大,其DPPH·的IC50为21.79±0.60μg/mL。通过测定粗提物相和3种萃取相对HSF的细胞毒性,结果为在小于5μg/mL时均没有细胞毒性。该浓度下乙酸乙酯相的细胞抗氧化能力(CAA)最强,CAA值为57.71±5.19。其可以提升被600μmol/L H2O2损伤的细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活力和谷胱甘肽(GSH)含量,分别从0.75 U/mL和9.93μmol/L提升至2.13 U/mL和16.78μmol/L;同时能增加被2.0 mmol/L H2O2损伤的细胞存活率,存活率可从50%提升至78.77%。最后,对具有优异抗氧化能力的乙酸乙酯相进行进一步纯化、结构鉴定和性能测定。通过对6种不同型号大孔吸附物树脂的筛选,选择AB-8型大孔树脂,优化其洗脱条件。结果表明AB-8型大孔树脂的最优洗脱条件为上样浓度为1.5 mg/mL,上样pH为3.5,洗脱溶剂为60%乙醇溶液,洗脱流速为0.6 BV/h。经过葡聚糖凝胶Sephadex LH-20树脂进一步纯化后,得到多酚含量最高的组分4,其多酚含量为757.75 mg/g。UPLC-MS对其定性定量分析的结果表明,组分4的主要多酚成分为柯里拉京,含量为631.18 mg/g。组分4的化学法抗氧化能力的测定结果为,DPPH·、OH·和ABTS·的IC50值分别为17.92μg/mL,65.10μg/mL和49.73μg/mL,与柯里拉京能力差异不大;细胞法抗氧化能力测定结果表明,组分4的细胞毒性更低,在5μg/mL时细胞存活率为88.89±1.90%,柯里拉京为69.44±1.39%;对H2O2损伤细胞的保护作用比柯里拉京强,在1μg/mL时组分4和柯里拉京的细胞存活率分别为72.55±2.34%和58.62±3.13%;清除细胞内ROS的能力和提升SOD活力与GSH含量均与柯里拉京的能力相近。
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