化痰散结法对感染血吸虫小鼠肝纤维化的干预

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目的:探讨化痰散结法对血吸虫肝纤维化模型小鼠肝功能、肝组织中纤维连接蛋白、18kD转位蛋白(TSPO)表达的影响,并探究其作用机制,为中医药从“痰”论治肝纤维化提供试验依据。方法:采用血吸虫尾蚴感染正常BALA/c小鼠建造血吸虫肝纤维化模型,并制备50mg/kg、100mg/kg、150mg/kg低、中、高三种剂量化痰散结组方(浙贝母、漏芦乙醇提取物)中药药液,随机将小鼠分为正常组(A组)、模型组(B组)、化痰散结组方低剂量组(C组)、中剂量组(D组)和高剂量组(E组)。于第6周开始分别对C、D、E组小鼠采用化痰散结组方低、中、高三种剂量中药药液灌胃治疗,A组和B组小鼠采用蒸馏水灌胃治疗,治疗周期为8周。治疗结束,对所有小鼠采取眼球取血方式留取标本并利用生化分析仪检测血清ALT、AST含量,然后采用颈椎脱臼法处死小鼠留取3小块黄豆大小肝组织分别行HE染色观察各组小鼠肝脏病理变化、RT-PCR法检测纤维连接蛋白FNmRNA表达量和WestBlot检测TSPO表达量。结果:1.于第6周取模型组小鼠肝脏组织切片HE染色后显微镜下观察发现小鼠肝组织中虫卵肉芽肿和再生结节形成,汇管区纤维结缔组织增生,炎症反应明显,证明血吸虫肝纤维化模型建造成功。2.治疗结束后,模型组小鼠血清ALT、AST含量较正常组明显升高,差异有显著意义(P<0.01);而化痰散结组方低、中、高剂量组较模型组相比,小鼠血清中ALT、AST下降,差异有统计学意义(P<0.05);化痰散结组方低、中、高剂量组三者之间血清ALT、AST比较,其差异有统计学意义(P<0.05),其中以高剂量组小鼠血清ALT、AST降低最为明显,中剂量组次之。3.治疗结束后,化痰散结组方低、中、高剂量组与模型组相比,小鼠肝组织中虫卵肉芽肿平均面积缩小,差异有统计学意义(P<0.05);化痰散结组方低、中、高剂量组之间比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中以高剂量组虫卵肉芽肿平均面积缩小最为明显,中剂量组次之。4.治疗结束后,模型组与正常组比较,小鼠肝组织中FNmRNA表达量明显升高,差异有显著意义(P<0.01);化痰散结组方低、中、高剂量组与模型组相比,小鼠肝组织中FNmRNA表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05);化痰散结组方低、中、高剂量组之间比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中以高剂量组FNmRNA表达量降低最为明显,中剂量组次之。5.治疗结束后,模型组与正常组比较,小鼠肝组织中TSPO表达量明显升高,差异有显著意义(P<0.01);化痰散结组方低、中、高剂量组与模型组相比,小鼠肝组织中TSPO表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05);化痰散结组方高剂量组分别与中、低剂量组比较,小鼠肝组织中TSPO表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05);化痰散结组方中、低剂量组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.采用血吸虫感染小鼠一般在6周左右能建成血吸虫肝纤维化模型,且感染尾蚴一般以15条左右为宜。2.化痰散结法治疗血吸虫肝纤维化小鼠有一定的疗效。3.化痰散结法可能是通过抑制炎性细胞和肝星状细胞TSPO的表达和FN的分泌达到改善肝脏炎症状态、保护肝功能、阻断纤维化进展的作用。
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