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本文通过4~5日龄白纹伊蚊胸腔接种和经口感染登革病毒,并使之产卵,收集的蚊卵27℃保存7天后一部分检测,一部分孵化,幼虫饲养至成蚊,如此反复传代。检测每一代蚊卵内登革病毒,以每一代感染登革病毒白纹伊蚊总RNA为模板进行RT-PCR扩增502bp的片段,再设计登革Ⅰ、Ⅱ型病毒型特异性引物,然后以RT-PCR产物为模板,分别用对应型特异性引物作套式PCR,目的产物经T-A克隆后测序鉴定。(2).用C6/36细胞分离各子代成蚊体内登革病毒,并用TCID50滴定其滴度。
本文通过白纹伊蚊胸腔接种登革Ⅰ、Ⅱ型病毒和经口感染登革Ⅰ型病毒,并使之传代,运用RT-PCR、套式PCR和C6/36细胞TCID50测定滴度,证实我国白纹伊蚊可以连续经卵传递登革病毒,本实验建立的检测方法经进一步完善在登革热的流行病学调查及疾病监测等方面将有一定的现实意义。