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肿瘤是现代医学家力图攻克的世界性人类疾病。肺癌作为常见的呼吸系统恶性肿瘤之一,有着很高的病死率。由于多数患者确诊时已错过手术切除的最佳时期,因此,以铂类药物为基础的联合化疗成为肺癌尤其是非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者的主要治疗手段。奥沙利铂做为第三代铂类抗癌药,与顺铂、卡铂相似,均以DNA为作用靶点,通过形成铂化DNA化合物而抑制DNA的合成,同时抑制DNA的修复。不同的是,奥沙利铂的抗瘤谱比顺铂和卡铂广,毒性相对较低,其对部分原发性或获得性顺铂或卡铂耐药的细胞株仍然有效。
Survivin于1997年由耶鲁大学的Ambrosini等发现,做为凋亡抑制蛋白家族(Inhibitor of Apoptosis family of proteins,IAP)最新成员,近年来,围绕Survivin对细胞凋亡的抑制作用及对细胞周期的调控作用已有部分研究,而对Survivin基因的表达与化疗药物的疗效以及肿瘤的耐药性的研究目前较少。CyclinDl作为典型的G1期细胞周期蛋白,其过表达会导致G1/S期细胞关键点缺陷,在肿瘤的发生发展中起到重要作用。
Survivin和CyclinDl分别从抑制细胞凋亡和促进细胞增殖两方面起到促进肿瘤细胞生长的作用,在用奥沙利铂治疗肺癌患者的过程中,这两种基因的表达变化及其与药物疗效的关系,目前研究较少。
目的：研究奥沙利铂(Oxaliplatin,L-OPH,OXA)对人肺腺癌A549细胞株的生长抑制作用和对Survivin、CyclinDl基因表达的影响,探讨奥沙利铂抑制肺癌细胞增殖的机制。
方法：
1.以不同浓度(0,7.81,15.63,31.25,62.50,125μg/ml)的奥沙利铂干预体外培养的肺腺癌细胞株A549,分别于24、48和72小时后,采用MTT方法检测细胞光密度值,分析A549细胞的增殖活性。
2.采用流式细胞术检测药物处理后细胞周期变化。
3.采用Hoechst33342染色方法在荧光显微镜下观察药物处理后细胞形态变化。
4.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测药物处理前后Survivin和CyclinDl的mRNA表达情况。
5.所有实验数据采用SPSS17.0软件分析。计量资料以均数±标准差(-x±s)表示。多样本均数比较,经方差齐性检验后,采用单因素方差分析(F检验)或Kruskal-Wallis检验,并进一步做多重比较(Bonferroni检验),检验水准为α=0.05。
结果:
1.奥沙利铂能有效抑制A549细胞的增殖,24h、48h、72h三个时间点处理后,五个浓度组的细胞增殖抑制率与同一时间点对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05),呈时间.剂量依赖性。
2.奥沙利铂能改变A549细胞的周期分布,主要将其阻滞在S期和G2/M期。五个浓度组的细胞周期分布与同一时间点对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05),呈时间一剂量依赖性,其中31.25μg/ml、62.50μg/ml、125μg/ml浓度组作用72h后出现凋亡峰。
3.荧光染色后倒置显微镜下结果显示,药物作用组细胞形态不规则,随药物浓度增高,可见细胞内核物质边集增多,出现核碎片及凋亡小体。
4.奥沙利铂作用48小时后A549细胞Survivin、CyclinDl基因mRNA的表达明显低于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),且该抑制效应呈浓度依赖性。
结论：奥沙利铂可以抑制A549细胞株的增殖、改变其周期分布、诱导其凋亡,且呈一定的剂量-时间依赖性;其机制可能与奥沙利铂下调Survivin和CyclinDl基因的表达有关。