【摘 要】
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我们采用骨髓培养法,成功的培养了成人成骨细胞,培养一周时可见圆形贴壁细胞,含单个核,两周后成为三角形、长梭形,3-4周细胞融合成单层.经碱性磷酸酶组织化学染色,骨钙素免疫
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我们采用骨髓培养法,成功的培养了成人成骨细胞,培养一周时可见圆形贴壁细胞,含单个核,两周后成为三角形、长梭形,3-4周细胞融合成单层.经碱性磷酸酶组织化学染色,骨钙素免疫荧光组化染色.均为阳性;茜素红染色亦为阳性,证实其为成骨细胞,且具有体外矿化能力.特异性放射受体分析表明在未标记Leptin存在下,成骨细胞<125>I-Leptin的放射性结合率为13±2.1﹪(n=3),加入未标记Leptin后结合率明显降至2.3±0.75﹪(P<0.01),表明Leptin可与成骨细胞上Leptin受体特异性结合.该研究用SYBR Green I染料实时监测定量RT-PCR的方法证实Leptin可调节OPGmRNA表达,使OPGmRNA表达呈剂量依赖性降低,时间依赖性不强,但仍有下降的趋势.因此我们推测,leptin作为一种内分泌因子,可与成骨细胞上leptin受体特异结合,通过调节成骨细胞OPGmRNA表达,使OPGmRNA表达降低,OPG生成减少,和其它因子共同参与骨再建调节.该实验所用的SYBR Green I实时监测定量RT-PCR技术准确性,敏感性,特异性高,经济,廉价,是一种值得推广的定量RNA和DNA的新方法.
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